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时间:2020-04-29
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1、基因工程概念——定向改造生物的新技术别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果人类所需要的产品剪切→拼接→导入→表达DNA分子水平基因生物外基因拼接技术DNA重组技术原理:基因重组基因工程在生物体外,通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出人类所需要的产品。提取目的基因直接分离基因:鸟枪法基因工程基本操作步骤目的基因与运载体结合目的基因导入受体细胞目的基因的检测和表达人工合成基因反转录法据已知的氨基酸序列合成DNA同一种限制性内切酶切割质粒和目的基因,加
2、入DNA连接酶,形成重组DNA分子主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的方法根据受体细胞是否具有某些标记基因判断目的基因是否导入检测表达受体细胞表现出特定的性状二 基因工程的成果与发展前景(一)基因工程与医药卫生1)生产基因药品2)基因诊断与基因治疗基因工程在医药卫生领域的应用在传统的药品生产中,某些药品如胰岛素、干扰素直接生物体的哪些结构中提取?药品直接从生物的组织、细胞或血液中提取。(一)基因工程与医药卫生传统生产方法的缺点由于受原料来源的限制,价格十分昂贵。可利用什么方法来解决上述问题?利用基因工程方法制造“工程菌”,可高效率地生产出各种高质量、低成本的
3、药品。我国生产的部分基因工程疫苗和药物⑴基因工程药品的生产微生物生长迅速,容易控制,适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内,让它们产生相应的药物,不但能解决产量问题,还能大大降低生产成本。胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取,100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素,其产量之低和价格之高可想而知。将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌,每2000L培养液就能产生100g胰岛素!大规模工业化生产不但解决了这种比黄金还贵的药品产量问题,还使其价格降低了30%-50%!干扰素治疗病毒感染简直是“万能灵药
4、”!过去从人血中提取,300L血才提取1mg!其“珍贵”程度自不用多说。人造血液、白细胞介素、乙肝疫苗等通过基因工程实现工业化生产,均为解除人类的病苦,提高人类的健康水平发挥了重大的作用。人造血液及其生产治疗侏儒症的唯一方法,是向人体注射生长激素。而生长激素的获得很困难。以前,要获得生长激素,需解剖尸体,从大脑的底部摘取垂体,并从中提取生长激素。现可利用基因工程方法,将人的生长激素基因导入大肠杆菌中,使其生产生长激素。人们从450L大肠杆菌培养液中提取的生长激素,相当于6万具尸体的全部产量。基因工程药品——生长激素转基因动物的乳腺。就基因药物而言,最理
5、想的表达场所是哪里?是指把人或哺乳动物的某种基因导入到哺乳动物(如鼠、兔、羊和猪)的受精卵里,目的基因若与受精卵染色体DNA整合,细胞分裂时,该基因随染色体的倍增而倍增,使每个细胞中都带有目的基因,使性状得以表达,并稳定地遗传给后代,从而获得基因产品。这样一种新的个体,称为转基因动物。什么叫转基因动物?1)乳腺是一个外分泌器官,乳汁不进入体内循环,不会影响转基因动物本身的生理代谢反应。2)从乳汁中获取目的基因产物,产量高,易提纯,表达的蛋白质已经过充分的修饰加工,具有稳定的生物活性。3)从乳汁中源源不断获得目的基因的产物的同时,转基因动物又可无限繁殖。
6、为什么乳腺能成为基因药物最理想的表达场所呢?基因诊断:也称为DNA诊断或基因探针技术,即在DNA水平分析检测某一基因,从而对特定的疾病进行诊断。探针制备:放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的DNA分子;原理:利用DNA分子杂交原理;DNA分子杂交原理:DNA分子杂交是基因诊断最基本的方法之一。其基本原理是:互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链,即能够进行杂交。这种结合是特异的,即严格按照碱基互补配对进行。因此,当用一段已知基因的核苷酸序列作为探针,与被测基因进行接触,若两者的碱基完全配对成双链,则表明被测基因中含有已知的基因序列。基因探针:
7、基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因,或基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。基因诊断技术在什么方面发展迅速?在诊断遗传性疾病方面发展迅速。目前已经可以对几十种遗传病进行产前诊断。1)β—珠蛋白的DNA探针→镰刀状细胞贫血症2)苯丙氨酸羧化酶基因探针→苯丙酮尿症3)白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的DNA探针→白血病举例⑵基因治疗我国研究人员正在制备用于基因治疗的基因工程细胞通过基因工程给患有遗传病的人体内导入正常基因可“一次性”解除病人的疾苦。是指是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中,达
8、到治疗疾病的目的。患半乳糖血症的患者,由于细胞内半乳糖苷转移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷转移酶,使
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