实验一：组培室的设计及仪器设备的使用.doc

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1、专业班级：生物技术二班学号：20120322208姓名：莽斌实验日期：2014年3月10日温度：19.8℃大气压：82.07KPa同组人：王雪娇，杨佳梅，卢晓燕，蒋薇，袁蓉，林星龙，刘显号，关德宏，李玉圣实验一：组培室的设计及仪器设备的使用一．实验目的1.了解植物组织培养实验室和工厂化植物组织培养实验室的主要区别。2.掌握植物组织培养实验室的布置与设计。3.掌握植物组织培养实验室常见仪器设备的使用。4.学会分析各类植物组织培养实验室的优缺点。二．实验原理1.植物组织培养实验室是完成植物组织培养的重要

2、场所，实验室的布置与设计的好坏影响着组培是否成功。2.植物组织培养实验室由准备室，接种室，培养室和温室四大部分组成。（1）准备室功能：用于培养器皿的清洗，干燥，培养基的配置，分装和灭菌，试管苗的出瓶及整理工作。（2）接种室（无菌操作室）功能：接种材料的灭菌，接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。（1）培养室功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度，光照及湿度，以促进植物材料的生长及分化。（2）温室1.在实际生产中应按照植物组织培养实验室布置

3、与设计的要求来完成组培。2.组培的设备和仪器是确保组培完成的条件，应正确使用相关仪器。一．仪器设备植物组织培养实验室1.常规设备（1）天平精确度达0.0001g的天平（分析天平）用于称量微量元素，植物生长调节剂和一些较高精确度的实验药品。精确度达0.01g和0.1g的天平用于称量大量元素，天平应放在平稳，干燥，不受震动的天平操作台上，应尽量避免移动。（2）冰箱一般家用普通冰箱即可。（3）酸度计用于测定培养基及其他溶液的pH值，一般要求可测定范围为1-14，精度为0.01。（4）离心机用于细胞，原生质

4、体等活细胞分离，也用于培养细胞的细胞的细胞器，核酸及蛋白质的分离提取。（5）加热器用于培养基的配制。（6）解剖镜用于观察培养物的形态结构及茎尖剥离，可采用双筒实体解剖镜。1.灭菌设备（1）高压灭菌锅用于耐热培养基，无菌水及各种器皿，用具的灭菌，有小型手提式，中型立式，大型卧式等不同规格。（2）干热消毒柜用于洗净后的器皿干燥，也可用于干热灭菌和测定干物重。（3）过滤灭菌器2.无菌操作设备（1）超净工作台用于培养材料的消毒，分离切割，转接等，是常见的无菌操作设备，具有操作方便舒适，无菌效果好，工作效率高

5、等优点。（2）接种箱接种箱是一个密闭较好的木质或玻璃箱，入口有袖罩，箱内安装紫外灯和日光灯。（3）接种工具杀菌器用于接种工具灭菌3.培养设备（1）光照培养架（2）培养箱（3）照度计用于测量培养架灯光的光照强度。一．实验步骤1.在教师的带领下参观植物组织培养实验室2.在教师的讲解下完成组培常见设备仪器的使用方法3.常用实验用具的洗涤高压灭菌锅的使用方法：（1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。（2）加热使锅内产生蒸气当压力表指针达到33.78kPa时，打开排气

6、阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。（3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物灭菌锅使用注意事项a待灭菌的物品放置不宜过紧；b必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；c灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力

7、降至与大气压相等后才可开盖；d已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌锅，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。酸度计的使用步骤：（1）检查酸度计的接线是否完好。接通电源，按下背面的电源开关，预热30min后方可使用。（2）取下复合电极上的电极套，注意不要将电极套中的饱和KCl溶液撒出或倒掉。用蒸馏水冲洗电极头部，用滤纸吸干残留水份。（3）定位在测量之前，首先对pH计进行校准，我们采用两点定位校准法，具体的步骤如下：a.打开电源开关，按“pH/mV”按钮，使仪器

8、进入pH测量状态；b.用温度计测量被测溶液的温度，读数，例如25ºC。按“温度”旋钮至测量值25ºC，然后按“确认”键，回到pH测量状态。　　c.调节斜率旋钮至最大值。d.打开电极套管，用蒸馏水冲洗电极头部，用吸水纸仔细将电极头部吸干，将复合电极放入pH为6.86的标准缓冲溶液，使溶液淹没电极头部的玻璃球，轻轻摇匀，待读数稳定后，按“定位”键，使显示值为该溶液25ºC时标准pH值6.86，然后按“确认”键，回到pH测量状态。e.将电极取出，洗净、吸干，放入pH为4.0