油茶饼粕纤维素降解菌的筛选与鉴定-论文.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第5期-——299．——杨勇，聂旭，王健，等．油茶饼粕纤维素降解菌的筛选与鉴定[J]．江苏农业科学，2014，42(5)：299—301油茶饼粕纤维素降解菌的筛选与鉴定杨勇，聂旭，王健，杨帆，杨文蛟，吴永尧(湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙410128)摘要：从土壤中筛选出酶活性相对较高且对油茶饼粕中的抑菌物质具有较高抗性的菌种YY一1、YY一2和YY一3，在此基础上测定它们的酶活性[5843、14834、8264U／(tool-h)]，并比较这3个菌种的生物量，最终确定YY一2为最佳菌种。通过菌种18SrDNA测序比

2、对后发现，YY一2菌种与烟曲霉的相似性达99％。关键词：油茶饼粕；纤维素；还原糖；降解菌中图分类号：Q939．9文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)05-0299一o2油茶(CamelliaDimAbe1)属山茶科(~eaeeae)山茶属(CMC—Na)1．5g、NH4NO30．5g、MgSO4·7H2O0．5g、植物，为常绿小乔木或灌木，为我国特有的木本食用油料树KH2PO40．5g、水100mL、茶皂素5g，pH值自然，121℃灭菌种，有2000多年的栽培和利用历史，与油橄榄、油棕、椰子并30min。液体产酶鉴定培养基：CMC—Na

3、1．5g、NH4NO，称为世界四大木本油料植物，与乌桕、油桐和核桃并称为我国0．5g、NgSO4·7H200．5g、KH2PO40．5g、Nail2PO40．5g、四大木本油料植物⋯。近年来，油茶越来越受到人们的青睐CaCI~0．5g、水100mL、茶皂素5g，pH值自然，121℃灭菌和关注，但是目前油茶产业仍面临着很多问题，其中之一是油30rain。茶饼粕的综合利用效率较差，一般主要作为燃料和清塘剂等1．2．2菌种的富集从笔者所在实验室周边称取1g土壤，使用，使茶粕中含量较高的粗纤维没有得到充分的利用。置于100mL无菌水中，于150r／rain摇床上

4、摇动30min；吸取所以，如何能够有效地利用油茶饼粕是一个亟待研究的问题。1mL上清液于富集培养基中，37℃、150r／rain摇床上培养油茶饼粕中的粗纤维、粗蛋白含量达到了21．7％、14．4％，具24h。有很高的应用价值，近年来关于油茶饼粕的应用研究兴起，人1．2．3纤维素分解菌的处理(1)初筛。吸取富集发酵液们发现油茶饼粕在饲料和肥料上的应用具有良好的前景，用0．1mL，均匀地涂布于纤维素分解初筛培养基上，置于37℃作肥料时利用茶皂素抑菌及其对农业害虫的灭杀作用，减下培养72h。(2)复筛。挑选出生长较好的菌株，在纤维素少了农药的使用量；但茶皂素对

5、微生物都有抑制作用，且分解菌复筛培养基上接种，置于37℃下培养72h。(3)纯纤维素含量高，自然分解慢，不能快速、充分地为土壤微生物化。挑取长势好的菌株，进行1O～、1O～、1O一、lO～、10～、的生长提供足够的营养，导致土壤中某些功能丧失或减弱。l0一、1O～、10一、10稀释，并涂布在纤维素分解菌复筛培养因此，降解纤维素、增加还原糖含量、提供微生物生长的营养基上，置于37℃下培养72h，挑选单菌落进行保存。非常有必要。本试验主要是从笔者所在实验室周边的多种土1．3项目测定及其方法样中选出能够抗油茶饼粕中抑菌成分且具有高活性的纤维素1．3．1纤维素酶

6、活性的测定将筛选的菌落用茶籽饼粕液分解菌株，通过对比分析寻找出最佳菌株，并进一步进行菌种体发酵培养基培养，取1mL发酵液，经3000r／rain离心的鉴定，确定筛选出笔者所需要的菌种。15rain，取上清即为粗酶液；移取1．5mL含有0．5％CMC—1材料与方法Na的醋酸缓冲液(O．05mol／L，pH值4．8)于试管中，加入酶液0．5InL，于50℃下保温30rain，用3，5一二硝基水杨酸1．1材料试验菌种主要由笔者所在实验室自行筛选。茶粕由郴州(oNs)比色定糖法测定降解后的溶液中的还原糖含量。在上述条件下，定义1h催化纤维素水解生成1tool葡萄

7、糖的邦尔泰苏仙油脂有限公司提供。1．2纤维素分解茵的筛选酶量为1个酶活性单位(u)。试验结果均为3次重复所得的平均值。1．2．1培养基的制备纤维素分解初筛培养基：茶粕15g、(NH4)2S042．0％、MgSO0．05％、KH2PO40．1％、水1．3．2纤维素含量的测定称取烘干至恒重的样品1g于100mL。纤维素分解菌复筛培养基：羧甲基纤维素钠圆底烧瓶中，加入100mL0．255mol／LH：SO。溶液，在3—5rain内迅速沸腾，然后缓沸1h，倒掉酸性溶剂，调节pH值至中性；加入100mL0．333mol／LNaOH溶液，在3—5rain内收稿日期：

8、2013—09—18迅速沸腾，然后缓沸1h，倒掉溶液，调节pH值至中性；加入作者