啤酒酵母Ⅲ号染色体ARS305附近核小体的定位-论文.pdf

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1、第53卷第8期湖北农业科学V01．53No．82014年4月HubeiAgriculturalSciencesApr．，2014啤酒酵母Ⅲ号染色体ARS305附近核小体的定位吴亚坤，杜志强，王建英(内蒙古科技大学生物工程与技术研究所，内蒙古包头014010)摘要：以微球菌核酸酶法分离的啤酒酵母(Saccharomycesce础)染色体单核小体DNA为模板进行PCR．根据不同靶序列PCR产物拷贝数的不同定位核小体位置。结果表明，啤酒酵母Ⅲ号染色体ARS305附近核小体位置大约在391们位到39269位、39318位到39470位及395413位到3

2、9694位之问，理论计算结果与试验结果基本一致关键词：啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)；核小体；定位；llI号染色体；自主复制序列305中图分类号：Q34：Q949．326．1文献标识码：A文章编号：0439—8114(2014)08—1928—02LocationofNucleosomearoundARS305onChromosomeIIIofSaccharomycescerevisiaeWUYa-kun，DUZhi-qiang，WANGJian-ying(TheInstituteofBioengineeringand

3、Technology，InnerMongoliaUniversityofScienceandTechnology，Baotou014010，InnerMongolia，China)Abstract：UsingthevariationpatternofcopynumberofPCRproductasafunctionofPCRtargetsequence，positiontothenucleosomelocationswasdeterminedwhenisolatedmono—nucleosomeDNAofSaccharomycescerev~ia

4、ebymicrococcalnucleasewasusedasthePCRtemplate．TheresultsshowedthattherewerethreenucleosomesaroundARS305ofchromosomeIIIlocatedat39107—39269bp，39318—39470bp，and39540-39694bp．Computationalcalculationwasinagreementwiththeexperimentaldata．Keywords：Saccharomycescerevisiae；nucleosom

5、e；location；chromosomeIII；ARS305真核生物的染色质以组蛋白八聚体和紧密缠研究所分子生物学实验室低温保存。绕其上147bp的DNA片段为基本组成结构单元，1．2方法由于核小体在DNA分子上的可移动性．相邻核小1．2．1引物设计从SGD网站获取啤酒酵母染色体之间的自由DNA片段长度从l0bp至100bp不体111ARS305的基因序列(39159—39706)，并依前后等[1]在研究啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)延伸后序列(39032—39761)设计15对PCR引物。DNA分子复制过程中．发现

6、许多具有自主复制活性1．2-2单核小体DNA提取①摇菌。挑取单菌落的序列。试验研究表明．在自主复制序列(Au．接种于2mLYPD培养基中，30℃、200r／min过夜振tonomousreplicatingsequence．ARS)附近通常为核荡培养。②扩大培养。取过夜培养物按1：50()扩小体缺乏区域．而啤酒酵母Ⅲ号染色体具有强复制大培养至DD为0．9。③收集菌体。加入2％的甲起始活性的ARS305及其附近区域却有相对稳定的醛交联细胞作用30min．然后用125mmol／L的甘氨核小体占据信号本研究从理论预测和试验验证酸使反应猝熄．4℃、400

7、0r／min离心10rain收集细两方面来研究ARS305附近的核小体占据情况．为胞．并用20mL0．O1mol／L的PBS缓冲液清洗菌体1后续研究奠定基础次。④原生质体提取。将菌体重悬于6mLA液(50mmo]]LTris—HC1pH7．4、1mol／LD一山梨醇、101材料与方法mmol／L3-巯基乙醇)中．加入终浓度为0．25mg／mL1．1材料的酵母裂解酶裂解细胞．4oC4000r／min离心10啤酒酵母由内蒙古科技大学生物工程与技术min收集细胞后．重悬于2mLB液(1mol／LD一山梨收稿日期：2013—05一10作者简介：吴亚坤(1

8、986一)，男，河北高邑人，硕士，研究方向为生物化学与分子生物学，(电话)15947627992(电子信箱)wykctx1987@163