两株抗镉细菌鉴定及抗性研究-论文.pdf

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1、第26卷第4期甘肃科学学报V0lJ26NO．42014年8月JournalofGansuSciencesAug．2014两株抗镉细菌鉴定及抗性研究窦敏娜(咸阳职业技术学院，陕西咸阳712000)摘要：从北京东三岔铅锌尾矿附近的土壤中筛选出两株高度抗镉细菌，经过形态观察、生理生化特征鉴定、16SrDNA序列比对分析及biolog快速鉴定，分别为多杀巴斯德氏杆菌和黄杆菌．并对两株菌做了抗生素抗性和重金属抗性分析．关键词：镉；细菌鉴定；重金属抗性；抗生素抗性中图分类号：X53文献标志码：A文章编号：1004—0366(2014)04—0040

2、—04北京东三岔铅锌矿区附近的土壤，镉含量均超800rag／I、1000mg／I、1200rag／I、l500rag／I、过0．60mg／kg．根据国家环境质量二级标准，矿区l700mg／I、2000mg／I，倒平板备用．附近土壤中镉含量已超过国家标准，最高超标4．13重金属抗性培养基：蛋白胨10g，氯化钠5g，去倍，最低超标1．15倍，该矿区附近土壤已受到镉的离子水l000mI，pH值为7．0～7．2．经121℃高温严重污染llj．实验从该铅锌尾矿附近的土壤中筛选灭菌30min，待冷却后分别加入已灭菌的0．1mol／I出两株高度抗镉的

3、细菌，多杀巴斯德氏杆菌(Pas—的硫酸铜，氯化锌，硝酸铅，乙酸钴及氯化镉储液，至teurellaulto~ida)和黄杆菌(Flavobacterium)．终浓度分别为0．1mmol／I⋯05retool／I⋯10retool／I、重金属的抗性基因大多都有质粒编码，并且有2．5mmol／I⋯50mmol／L、8．0retool／I12．0retool／I质粒编码的重金属抗性基因的抗性极强，比染色体20．0mmol／L及30．0mmol／I．编码的高出许多]，而抗生素抗性基因是有质粒1．2抗镉细菌的筛选及鉴定编码的，已有许多关于质粒同时赋

4、予细菌的重金属土样采自离北京郊区东三岔铅锌尾矿矿口抗性和抗生素抗性的报道[，并且通过实验证明，20m远的果树林地，取1g土样于含镉100mg／I当质粒消失后抗性均随之消失．以下在对抗性细菌的液体培养基20mI中，25℃振荡培养过夜．静置重金属抗性特征和抗生素抗性特征进行研究，希望取上清100肚I涂于含镉固体平板培养基，在25℃通过本研究为进一步阐明细菌的抗镉机理，为利用培养观察，待菌落长出后，转接于更高含镉平板进行微生物治理土壤镉污染提供必要的理论基础，更好培养．地将利用抗镉微生物修复环境污染．对分离细菌进行形态和分子生物学鉴定j．1．

5、3抗镉细菌的抗镉机理初步研究1材料与方法(1)分离菌株对镉最小抑制浓度测定将纯培1．1培养基的制备养菌株接种于液体培养基中，25℃振荡培养过夜．抗性细菌筛选培养基：蛋白胨10g，氯化钠5g，将菌液浓度稀释至10后，取1O肚L依次涂布于镉十二水合磷酸氢二钠9g，磷酸二氢钾1．5g，去离子浓度逐渐递增的固体培养基平板上，每个镉浓度做水1000mI，pH值为7．1～7．3．121℃高温蒸汽3次重复．25℃恒温培养3天，观察菌落生长情况，灭菌30min．在此液体培养基中加入琼脂粉20g／I，确定重金属最小抑制浓度MIC(MinimalInhib

6、itory经高温蒸汽灭菌，待培养基冷却至50℃时，加入预Concentration，MIC)[．先灭菌的0．1mol／I氯化镉储液，调配镉的终浓度(2)质粒消除试验将纯培养菌株接种于含有分别为100mg／I、200rag／I、300mg／L、500mg／I、SDS浓度为0．3的缓冲蛋白胨水液体培养基收稿日期：2014-0303作者简介：窦敏娜(1982一)，女，陕两咸阳人，硕士研究生，助教，主要从事微生物教学和科研丁作．Email：doumina0206@163．corn^00一粗^00一艇粗42甘肃1科1学l学0报0OO2Ol4年第4

7、期987654321的抗性强，从研究中已知多杀巴斯德氏杆菌对重金属镉的抗性也是最强的，所以从重金属抗性和抗生素抗性实验研究证实，重金属抗性和抗生素抗性确实存在相关性，即重金属抗性越强，抗生素抗性也越强，说明两者的抗性在基因水平存在相关性，这为我们进一步研究它们的抗性机理提供了重要依据．00．10．51．02．55．08．012．020．030．0表2抗镉菌株抗生素抗性结果培养液重金属浓度／(mmo1．L)Table2Antibioticresistanceofeadmium-resistantbacteria·镉离子-钻离子·铜离子·锌

8、离子+铅离子抑菌圈直径／mm图2多杀巴德氏菌在重金属环境中的生长曲线抗生素——多杀巴斯德氏杆菌黄杆菌Fi昏2Curveof~rowthofpasteurellamultocidainheavymetals注