汇报人张蕾导师何俏军教授杨波教授.ppt

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1、Nutlin-1增强全反式维甲酸（ATRA）诱导的白血病细胞分化的作用及其机制研究汇报人：张蕾导师：何俏军教授杨波教授浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所研究背景——ATRA肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化(inductionofdifferentiation)是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白血病的首选手段。维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维甲酸结合蛋白的结合增强等作用相关。MDM2p53ApoptosisCellc

2、yclearrestDNArepair…DegradationNuclearexport231研究背景——NutlinsMDM2p53Stratege1Stratege2Stratege3（Nutlins）研究结果及结论1MTT法PI单染结合流式细胞术*Nutlin-1仅对p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋亡诱导作用，对p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。？Nutlin-1是否与ATRA具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若有，则其分子机制是否与p53相关？研究结果及结论2CD11b%CountsCD11b表面抗原检测NBT还原实验CD11b表面抗原检测

3、台盼蓝染色结合细胞计数*Nutlin-1仅对HL60或NB4细胞株（p53突变或缺失）具有一定的增强ATRA分化诱导能力的作用，而对U937（p53野生型）无增强作用。？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用是否必须在p53无功能的细胞株中才能体现？研究结果及结论3WesternBlotting法CD11b表面抗原检测*Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用与p53无关。？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用机制是什么？研究结果及结论4RealTimePCR法JC1、Rhodamine123外排实验MTT法WesternBlotting法*AT

4、RA能够在HL60及NB4细胞中诱导p-gp的高表达，但不能在p53野生型或p53缺失的U937细胞中诱导p-gp的高表达。？ATRA诱导p-gp高表达的现象是否与Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用相关？研究结果及结论5p-gpATPase活性检测Nutlin-1aNutlin-1bWesternBlotting法RealTimePCR法*Nutlin-1与ATRA均为p-gp的底物，Nutlin-1与ATRA共同作用时能够抑制ATRA的外排，增强ATRA的分化诱导作用。研究结论ATRAATRAATRANutlin-1HL60/NB4cellsp-gpATR

5、ANutlin-1增强分化能力的作用仅在经ATRA诱导高表达p-gp的细胞株中发挥，而与p53通路无关。Thankyou！