小鼠巨噬细胞吞噬现象的观察2.doc

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1、小鼠巨噬细胞吞噬现象的观察一、实验目的1.通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的试验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。2.了解巨噬细胞在机体非特异免疫屮的重要作用。二、实验原理高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜屮性粒细胞，具有吞噬作用的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要作用。当病原微生物或其他界物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物

2、，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在细胞质屮的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。巨噬细胞吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体免疫水平的高低。三、实验仪器、材料和试剂1•仪器、用具：显微镜、高压灭菌锅、解剖盘、解剖剪、1ml注射器、吸管、载玻片、盖玻片。2.材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。3.试剂：4%台盼蓝染液：台盼蓝染粉0.4克，加0.85%生理盐水100ml。6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝J：牛肉膏0.3克；蛋白豚1.0克；氯化钠0.5克；蒸催水100ml。加热后,

3、可加入6.0克可溶性淀粉，促使溶解，再煮沸灭菌，置40C冰箱保存，用时水浴熔化，加入适呈4%台盼蓝染液混匀，使呈蓝色。四、方法与步骤1.实验前2d,每天给小H鼠腹腔注射6%淀粉肉汤液（含台盼蓝）1ml。2.实验前，再向腹腔注射lml1%鸡红细胞悬液，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。3.20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按著鼠头后的颈部，使脊椎与脑髓间断开致死）。4.迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。5.取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖

4、上盖玻片，放置2分钟〜3分钟后在显微镜下镜检。观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺装的小突起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入一个或几个红细胞在胞质屮刚刚形成椭圆形的吞噬泡;

5、有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。六.注意事项1、给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤时要注意进针适度，注射量要合适。2、给小白鼠腹腔注射时，抓小鼠不要太紧，以免小鼠死亡。3、使用的载玻片要很干净。