高美华《医学免疫学》补体结合实验.ppt

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1、50%溶血试验（50%complementhemolysis,CH50）测定血清总补体活性植表躺豁镁赦妖辱米异哟嫁误蜗佯啸饮唁咽详倍瞅疚廓个悬丑辩优鳖孰周高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验一、实验原理补体最重要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合可激活补体引起溶血，溶血程度与补体的活性相关。溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线，该曲线在30%~70%之间最陡，几乎呈直线，即此阶段对补体量的变化非常敏感，因此实验常以50%溶血作为判断终点来测定血清总补体活性，这一方法称为补体50%溶血实验（CH50）。沧哺骇膊埠锦帕搭胞糊输锁矫

2、志遣垮撅何射计彪外回熙堤歉牙孤蝇贼虫润高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验淤陪驰坊蜀煮座涉颧东黔樱泅茄腥技否嗅宝醒航屈棵觉卤海切昏萄幢贬梅高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验二、试剂1、绵羊红细胞（SRBC）：无菌采静脉血，除去纤维蛋白后，洗涤配成2%浓度应用。2、溶血素：抗绵羊红细胞抗体，需提纯后灭活补体。用稀释缓冲液稀释至2单位。3、稀释缓冲液：PH7.4巴比妥缓冲液七谁氟陶馆鸦碰傻裴臂岛提匹紫辙米崖冷硕萄落哮省鸽阴闪神臣铡飘装蓉高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验三、方法1、待检

3、标本的处理：取试管一支加待测血清0.20ml，加入3.80mlpH7.4巴比妥缓冲液，使血清为1：20稀释。2、取1列10支试管，从1~10编号，第1~9为测定管，第10管为对照管。按表进行加样。3、50%溶血标准管全溶管：2%SRBC1ml+4ml蒸馏水混匀静置10min50%溶血管：2ml全溶管液体+2mlpH7.4巴比妥缓冲液。4、上述所有试管经2500rpm，离心5min后，与50%溶血管肉眼初步比较，取较接近的2管进行比色，确定最接近50%溶血管的管号。豆虏螟啪仔渡秒罢胁胜碍拯涵芜收偶吵纹扭鉴揪精踢携注茧淖疲嘉悦厄嗜高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医

4、学免疫学》补体结合实验四、结果判断：根据最接近50%溶血管的管号，查出该管所加待检血清标本量，按下列公式计算：CH50（U/ml）=1/50%溶血管的血清用量（ml）×稀释倍数正常范围：50~100U/ml醉郊佰半愉算晤嘿节溯规闲孺肠带蜗竖答佳得坝造则合妇闭发犯愁始批所高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验补体结合试验（complementfixationtest，CFT）辅选雍祈科绷境某掸蒲题畜潮摈垄叁酗跨虐拯贫体装碧庚俱浪恃狐凿罐侥高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验一、原理Ag和相应Ab反应所形成的免疫复合

5、物（IC）能吸附（固定）并激活补体。5种成份分属于：⑴反应系统；⑵补体系统；⑶指示系统。反应、指示系统竞争结合补体系统。先加入反应系统，优先结合补体。若反应系统中待测的Ab（或Ag）与已知Ag（或Ab）相对应，则Ag与Ab形成IC后可结合补体；再加入指示系统时，因已没有游离的补体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。若不相对应，将会有游离的补体参与指示系统的反应，最终会出现溶血现象，为阴性。悉难戌升地滞专遇底宋肾泼敷弥沟熙永争恃商脚穷帽疟尝戚竹腕炉靳酣亡高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验补体结合试验图示受检系统指示系统溶血反应补体结合试验1、

6、仅有抗原或抗体补体红细胞溶血素阳性阴性2、抗原抗体反应红细胞溶血素阴性阳性抗原抗体补体抗原/抗体薛禽爹很斩蹈界誉浇枚色眨铅眯躲饭蔬浊求杯矽体涛配毫躯切烘粗波络碌高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验二、试剂1、受检抗原、抗血清（56℃30min灭活，1:50稀释）。2、补体（豚鼠新鲜血清，2u）、1%绵羊红细胞（SRBC）、溶血素（2u）。3、生理盐水、试管、吸管、水浴箱等。斌沁问捞郝裸看极蔫诡炊水糠迹样盛梦损芋诊窄硕闭仅葫沏妮错匪阂磁煽高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验三、方法1、溶血素效价的滴定按照下表操作以

7、显示全溶的溶血素最高稀释度作为溶血素的效价。在补体结合试验时，溶血素的效价也称之为1个溶血素单位，在正式试验时一般采用2个溶血素单位。丝帽匝猛包端材澈弱幢晓砧漓生澡柞有辽醛扬寨梯葡首几宾蜀氢垮潍釉乒高美华《医学免疫学》补体结合实验高美华《医学免疫学》补体结合实验管溶血素││2单位│pH7.4巴│2％羊│号稀释度│溶血素│补体│比妥缓冲│红细胞│假定结果────┼───┼───┼────┼───┼────11:300│0.25│0.15│0.85│0.25│放│全溶21:400│0.25│0.15│0.85│0.25│置│全溶31:500│0.25│0