细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展

《细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据238牵，I，I素技盏H通毋⋯．．一M盯．，2009LERSINBIONOL0YVol20No22tKJ97几1ETECHC．盯．，dot：10．39696．issn．1009-0002．2009．02．026细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展沈国波，徐玉环，龚凤鸣，梁淑芳四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室，四川成都610041综述[摘要】细胞培养稳定同位素标记技术(S11．AC)是在细胞培养过程中，利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术．对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析．还可通过质谱图上一对轻一重稳定同位素峰的

2、比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平，实现对蛋白质的精确定量。SILAC结合质谱技术在定量蛋白质组学中发挥了巨大的作用，其应用范围从细胞系扩展到亚细胞器、组织与动物整体水平，具体的应用策略也在不断完善发展。我们总结评述了SII．AC技术在差异表达蛋白质组、蛋白质翻译后修饰、药物蛋白质组和蛋白质相互作用等方面的应用与进展。[关键词]细胞培养稳定同位素标记；定量蛋白质组学；质谱[中图分类号]Q52[文献标识码]A[文章编号】1009—0002(2009)02—0238—05ApplicationandDevelopmentoftheSILACTechniqueinProteo

3、micsSHENG1．1,o-Bo，XUYu-Huoa,GONGFeng-Ming,LIANGShu-FangStateKeyLaboratoryofBiotherapy，WestChinaHospital，SiehuanUniversity，Chengdu610041，China【Abstract】TheSILAC(stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture)techniqueincombinationwithm酗8spec—trometry(MS)cantakequantitativemeasurementofthee

4、xpressingproteinindifferentstatesaccordingtotheratiooflighttoheavyisotopicpeakderivedfromthelabelingprotein．Ithasplayedallimportantroleinthefieldofquantitativepro—teomics．TheapplicationofSILAChasbecomemoreandnloreextensive，anditsspecificsh'ate舀eskeeprenewing．Thispaperhasmadeasummaryoftheapp

5、licationanddevelopmentofSILACondifferentialexpressionproteome。proteinpost—translationalmodification,pharmaceuticalproteomeandproteininteractions，andSOon．【Keywords】stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture(SILAC)；quantitativepmteomies；massspectrometry定量蛋白质组学(quantitativeproteomics)足对组

6、织或细胞表达的蛋白质进行精确定量和鉴定的一门学科，研究方法主要包括双向凝胶电泳结合串联质谱技术和稳定同位素标记技术。传统的定量蛋白质组技术是双向凝胶电泳(2-DE)与质谱(MS)联用，通过蛋白斑点染色深浅的比较柬对蛋白质表达水平进行定性淀量分析。由于双向凝胶电泳技术对相对分子质量极高或极低、等电点极酸或极碱、低丰度蛋白质及膜蛋白等的分离和检测能力有限，用于定量比较蛋白质组学研究有很大的局限。近年新发展的细胞培养稳定同位素标记(stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture．StLAC【I】；或称aminoacid—codedt

7、agging，AAC印)技术，是在细胞培养过程中利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术对蛋白表达进行定晕分析的一种新技术，不仪可以对蛋白质进行定性分析，还可精确定量，具有样奉需求量少、操作简单、直接、高效等特点【11。1SILAC技术的原理分别用含轻型稳定同佗素(天然稳定同位素)和重型稳定同位索标记的必需氨基酸的培养基，对处于2种不同状态的细胞(如一种为正常细胞，另一种为病理状态的细胞)分别进行培养、标记，待细胞标记完全后，将经过轻、霞型稳定同位素标记的2种细胞等数量混合，提取蛋[j，或将分别提取的蛋白