纤维蛋白平板法测定纳豆激酶方法的改进

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1、重庆维普http://www.cqvip.com分析与检测中国酿造2008年第7期总第184期·77·纤维蛋白平板法测定纳豆激酶方法的改进杨明，董超，史延茂，张丽萍，李楠(1．河北工业大学化工学院，天津300100；2．河北省生物研究所，河北石家庄050081)摘要：对利用琼脂糖．纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活力的方法进行了改进，对测定纳豆激酶活力的标准曲线的规律进行了研究。研究发现，当尿激酶活力在2Oo1，mI．～lo0o0I，mI肘，尿激酶活力的常用对数lgu与对应的溶圈面积S呈线性相关，其表达式的斜率与孵育时间、孵育温度和平板厚度有

2、关。通过试验确定了测定纳豆激酶活力的最佳孵育时间为15h，此时的酶活测定标准曲线为：lgU=O、0052S+b，b值的确定方法为：将2种标准尿激酶液的酶活力和对应的溶圈面积分别带入标准曲线lgU=0．0052S+bq~，分别求出其对应的修正系数bl,b：，以b=为标准曲~lgU=0．o052s+b的修正系数，利用此法计算酶活力的相对误差为o．22％。关键词：纳豆激酶；酶活力；琼脂糖．纤维蛋白平板法中图分类号：0656文献标识码：A文章编号：0254—5071(2008)07—0077—04Improvementonthemethodof

3、measuringtheactivityofnattokinasewithagarose—fibrinplateYANGMing一，DONGChao，SHIYanmao，ZhangLiping，LINan2f1．CollegeofChemistryandChemicalEngineering,HebeiUniversityofTechnology,Tianjin300100,China；2．HebeilnsdtuteofBiology,Shijiazhuango5oo8LChina)Abstract-．Themethodofmeasur

4、ingtheactivityofnattokinasewiⅡ1agarose-fibrinplatewasimproved．ThestandardcurvewhichwasusedtOmeasuretheactivityofnattokinasewasstu~ed．Therelationshipofthecommonlogarithmoftheurokinaseactivityandthedissolvingcirclesubmittedtheregressionshipwhiletheurokinaseactivityrangeis2

5、OOU／m1～lOOOOU／m1．TheslopeoftheequationisrelatedtOtheincubationtime，theincubationtemperatureandtheplateheightThebestincubationtimeofmeasuringthenatokinaseactivityis15h，andthestandardcurveis：lgU=0．0052S+b．ThevalueofbCanbecalculatedasfollows：puttheactwityvalueanddissolvingc

6、ircleoftwokindsofurokinasesintotheequationLlLlgU=0．o052s+b，thenbIandb2wereworkedout，andthevalueofb=三．TherelativeerrorisO．22％．Keywords：natokinase；enzymaticactivity；agamse-fibrinplate纳豆激酶(Nattokinase，NK)是由枯草芽孢杆菌(Bacil．了不便[5-6]。为了使琼脂糖．纤维蛋白平板法测定纳豆激酶1ussubtilis)的一个亚种．纳豆芽孢杆菌(B

7、acillusnatto)产活力更加准确、快捷，本文对利用琼脂糖．纤维蛋白平板生的一种具有强烈溶栓功效的碱性丝氨酸蛋白酶，与目前法测定纳豆激酶活力的方法进行了改进，对标准曲线中酶用于治疗的溶栓药物相比，纳豆激酶具有明显的优势，比活力和溶圈面积的相关关系进行了理论推导，得出了误差如无副作用、易于吸收、半衰期长、成本低、在溶栓过程中较小的测定酶活力标准曲线的统一方程。无出血倾向等，故对于纳豆激酶的研究已成为新一代溶栓1材料和方法药物研究的热点【1]。测定纳豆激酶活力的方法主要有纤维1．1材料和仪器蛋白平板法、琼脂糖．纤维蛋白平板法、纤维蛋白

8、块溶解注射用尿激酶(10000U／mL)：辽宁卫星制药厂有限责时间法、四肽底物法、血清板法和酶联反应吸附法固。在对任公司；琼脂糖：河北博海生物工程有限公司：Fibrinogen：纳豆激酶的发酵及分离提取操作