微生物富集方法及其应用的研究进展

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1、壁!丝roandInfections，September25，2010，5(3)：176．180http：／／imi．fudan．。du．cn·综述·微生物富集方法及其应用的研究进展张敬敬，刘晓颖。，钱开诚1．华东师范大学、上海市血液中心研究生培养基地，上海200051；2．上海市血液中心，上海200051摘要：目前临床上常用的微生物检测方法主要有分离和培养法、酶联免疫吸附试验(ELISA)以及核酸检测技术等。有效的微生物富集方法不仅为后续检测工作提供帮助，而且在某些微生物含量极低的情况下决定整个检测实验的成败。本文综述微生物富集方法原理及应用研究的进展。关

2、键词：微生物富集；过滤法；离心法；磁性分离法AdvancesinmicrobialenrichmentmethodsandapplicationsZHANGJing-JingI，LIUXiao—Yingz，QIANKai—Cheng21．ShanghaiBloodCenterGraduateStudentTrainingBase，EastChinaNormalUniversity，Shanghai20t~51，China；2．ShanghaiBloodCenter，Shanghai200051，ChinaAbstract：Microbialculture，e

3、nzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)，andthenucleicacidtestarethemainmethodsforclinicalmicrobialtestingtoday．Aneffectivemethodformicrobialenrmhmentwillnotonlybehelpfulinoptimizingthesensitivityoffollow—uptesting，butwillalsohelpdeterminetheavailabilityofsometestmethodswhentheamounto

4、fmicroorganismsinthesampleisextremelylow．Theresearchprogressinmicrobialenrichmentmethodsandapplicationsarereviewedanddiscussedinthisarticle．Keywords：Microbialenrichment；Filtrationmethod；Centrifugationmethod；Magneticseparation微生物富集方法主要包括物理法和生物亲和法器，过滤样品。由于滤膜的作用而将微生物滞留在2大类。常用物理方法包括过滤法

5、(filtration膜表面，使微生物与样品溶液分开，达到微生物富集method)、离心法(centrifugationmethod)等(表目的。临床上常用富集微生物的滤膜孔径为1)。生物亲和法是根据微生物特性将其与固相载体0．22m和0．45m，前者通常用于医用注射液及化结合以实现分离，它可分为特异性结合与非特异性学溶液除菌，后者常用于富集体液如脑脊髓液[1]、痰结合2种，磁性分离法是生物亲和分离法的一种。液[中的微生物。Sankaran等[。]利用膜过滤法过本文阐述过滤法、密度梯度离心法及磁性分离法3滤分离人粪便中的志贺菌属和大肠埃希菌，可有效种富集微生

6、物的方法及其应用，重点介绍磁性分离去除后续细菌检测的干扰因素。过滤法的优点在于法及其在病原微生物富集及检测方面的应用。成本低、速度相对较快且微生物浓缩效果明显，适用于大体积样本中微生物的富集。临床上过滤法主要1分离、富集细菌的物理方法及其应用用于体液等样品中的微生物富集，但较少用于有一1．1过滤法定黏稠度的样品，如全血或血小板等标本。原因在过滤法富集微生物是将适当孔径的滤膜放入滤于一方面血液制品中含有与微生物大小相仿的其基金项目：上海市卫生局青年科研项目(2008Yl12)通讯作者：钱开诚Correspondingauthor．QIANKai—Cheng，E

7、-mail：qiankaicheng@sbc．org．cn张敬敬，等：微生物富集方法其应的进星表1常用细菌富集方法的比较Tab．1Comparisonofmethodsformicrobialenrichment他细胞，无法完全将微生物与样品完全分离；另一方加速过滤而采用紧贴于滤膜的“搅拌”装置。面血液制品的黏稠度较大，易堵塞滤孔。1．2离心法为进一步提高过滤法富集细菌的效率，Zierdt离心法是借助于离心力，对比重不同的物质进等L4]利用带正电的滤膜通过静电吸附作用使革兰阳行分离的方法。在临床基础研究中，常用直接离心性菌从样品中分离，原理在于革兰阳性菌的细

8、胞壁法和密度梯度离心法来分离样品中的微生物。直接含有