白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠晶状体中p53表达的影响

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1、·68·黑龙江医药科学2013年l2月第36卷第6期白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠晶状体中P53表达的影响帅天姣，张剑，张涤。王冬兰(佳木斯大学附属第一医院眼科，黑龙江佳木斯1~oo3)摘要：目的：本实验通过研究白藜芦醇对s，Iz(链脲佐菌素)诱导糖尿病性白内障大鼠晶状体上皮细胞(1ensepithelialcell，LEC)的凋亡及晶状体中P=53表达的干预影响，以探讨白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠晶状体中上述指标的影响。方法：应用免疫组织化学染色法对大鼠LEC进行P53基因蛋白表达的检测，计算P53基因蛋白表达阳性细胞

2、百分率。结果：P53在正常晶状体上皮细胞中几乎无蛋白表达，在糖尿病性白内障晶状体中蛋白表达高于白藜芦醇治疗组，且白藜芦醇低剂量组中蛋白含量高于白藜芦醇低剂量组。结论：白藜芦醇能在一定程度上影响糖尿病性白内障晶状体中P=53的表达，抑制大鼠LEC凋亡，从而抑制糖尿病性白内障的进展。关键词：白藜芦醇；糖尿病性白内障；P53；LEC；凋亡中图分类号：R587．1；R776．1文献标识码：B文章编号：1008一Ol04(2013)06—0068—02随着生活水平和质量的提高，糖尿病以渐入国人的生献标准进行分级：I级，无混浊，晶

3、状体清亮透明；Ⅱ级，轻活，其并发症常常困扰着国人的健康，其眼科并发症越来越度混浊，晶状体周边有少量空泡；HI中度混浊，空泡扩散至中受重视。糖尿病性白内障(diabeticcataract，DC)是糖尿病心区域，晶状体核出现雾状混浊；IV级，晶状体高度混浊，周眼病的主要并发症之一，是导致成人致盲的原因之一，其发边空泡扩展到核区，核雾状混浊进一步加重；V级，核混浊，病机制复杂，晶状体上皮细胞(1ensepithelialcell，LEC)凋亡完全性白内障。在疾病发展过程中发挥重要作用，同时，氧化性损伤也是1．3检测方法重要

4、成因。自藜芦醇是一类非黄酮类多酚化合物，具有强免疫组织化学sP法测定大鼠LEC中P53蛋白的表达，大抗氧化、清除氧自由基以及抗凋亡能力。本实验旨在研各组晶状体取出后放人10％甲醛溶液中，4℃冰箱固定24一究白藜芦醇对(链脲佐菌素)诱导糖尿病性白内障大鼠48h，常规石蜡包埋，连续切片，染色，DAB显色，轻度复染，常LEC有无作用及对其晶状体中P53表达的影响，并探讨其可规封片。能的作用机制，以期为临床治疗提供更科学的依据。1．4结果判定1材料和方法P53阳性细胞为胞浆呈棕黄色，表达结果以高倍镜下每1．1实验药品与试剂张切

5、片随机选择5个高倍视野，计数50个细胞，计阳性细胞自藜芦醇和STZ均购自Sigma公司(纯度分别>99％和数及阳性率，按切片中阳性细胞数百分比例划为4个等>98％)，1'53一抗、二抗及显色剂购自武汉博士德生物工程级：0％一5％：(一)；5％一10％：(+)；20％一35％(++)；有限公司，PBS缓冲液、梯度酒精、4％多聚甲醛磷酸盐缓冲35％～50％(}+})。液、二甲苯、防脱剂等生化试剂均自上海生物工程有限公司。1．5统计学分析1．2实验方法采用SPSS17．0软件，数据用±s表示，比较采用单因素1．2．1实验动物

6、分组与处理：Wistar大鼠8O只(由长春亿方差分析，组间比较采用g检验。P<0．05为差异具有统计斯动物实验中心提供)，雌雄各半，2月龄，体质量(160±20)学意义。g，经散瞳实验检查结果显示晶状体均正常透明，随机分为42结果组：A正常对照组、B糖尿病模型组、C白藜芦醇低剂量治疗2．1晶状体混浊度观察组及D白藜芦醇高剂量治疗组，每组各20只，适应性喂养12w后正常对照组大鼠晶状体清亮透明；糖尿病模型组1w后，糖尿病模型组在禁食8h后一次性腹腔注射S'TZ(溶于大鼠晶状体I级、II级、III级、IV级和V级改变分别为

7、新鲜配制的0．1mol／L的柠檬酸缓冲液，pH4．5)60mg·3．0％、17．0％、53．O％、13．7％和10．O％；白藜芦醇低剂量组kg～，正常对照组以等量柠檬酸缓冲液腹腔注射，72h后鼠尾大鼠晶状体I级、II级、ⅡI级、IV级和V级改变分别为静脉采血测定空腹血糖，以血糖≥16．7mmol／L确定为糖尿47．3％、38．2％、14．5％、0％0和O％；白藜芦醇高剂量组大鼠病模型组。自藜芦醇高剂量治疗组及白藜芦醇低剂量治疗晶状体I级、Ⅱ级、m级、Ⅳ级和V级改变分别为65．6％、组在糖尿病模型组基础上每日固定时问分别

8、以白藜芦醇混20．3％、14．1％、0．0％和0．0％，经统计学分析，糖尿病组大悬液100mg·ks一·d～、20mg·l【g～·d体质量灌胃，正常鼠晶状体混浊度分别与白藜芦醇高、低剂量治疗组大鼠晶状对照组及糖尿病模型组均给予含0。02InI／mLDMSO的生理体混浊度差异具有统计学意义(P<0．o5)。盐水灌胃，分别于4w、8w