白花马蹄莲诱导胡萝卜软腐果胶杆菌ubig基因的克隆与功能分析

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1、江苏农业学报(JiangsuofAgr．Sci．)，2013，29(6)：1304～1312l304http：／／www．jsnyxb．eom刘怀阿，苏建坤，刘琴，等．白花马蹄莲诱导胡萝卜软腐果胶杆菌ubiG基因的克隆与功能分析[J]．江苏农业学报，2013，29(6)：1304—1312．doi：10．3969／j．issn．1000-4440．2013．06．019白花马蹄莲诱导胡萝卜软腐果胶杆菌ubiG基因的克隆与功能分析刘怀阿，苏建坤，刘琴，李婷，杨钟灵，蒋欢’(1．江苏里下河地区农业科学研究所，江苏扬州225007；2．南京农业大学植物保护学院，农作物生物灾害综合治理教育部重点实

2、验室，江苏南京210095；3．重庆市涪陵区农业科学研究所，重庆涪陵408000)摘要：利用含有无启动子的Km抗性基因的转座子mariner对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterteri—umcⅡrotovorumsubsp．carotovorum，Pcc)菌株PccS1进行转座诱变，建立突变体文库，以白花马蹄莲组织提取液为诱导物，诱导突变菌株，鉴定突变、并验证。筛选获得1株受白花马蹄莲组织提取液诱导的突变株PM5，经亚克隆鉴定，转座子插入位点为辅酶Q氧甲基转移合成酶ubiG基因(UbiquinonebiosynthesisO—methyhransferase)。利用同源重

3、组获得该基因的缺失突变体AubiG。与野生型相比，AubiG对不同寄主的致病性均减弱(黄花马蹄莲和白花马蹄莲上的病斑面积减半，大白菜的病斑面积仅为1／5)；突变菌株菌体沉降速率明显加快，生物膜产量降低约50％，无胞外蛋白酶产生。此外，AubiG对链霉素和新霉素抗性分别比野生型增强了2．0倍和26．5倍，突变菌株的相关功能经互补可以部分恢复。以上结果说明，ubiG基因可被白花马蹄莲诱导并参与胡萝卜软腐杆菌的致病作用。关键词：胡萝卜软腐果胶杆菌；mariner转座子；诱导表达；基因敲除；功能分析中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：10004440(2013)06—1304-09Cloni

4、ngandfunctionalanalysisofgeneubiGinducedbyZantedeschiaaethio-picatissueextractinPectobacterteriumcarotovorumsubsp．carotovorumLIUHuai．a，SUJian．kun，LIUQin，LITing，YANGZhong．1ing，JIANGHuan，(1．InstituteofAgriculturalScienceoftheLixiaheDistrictinJiangsuPr~ince，Yangzhou225007，China；2．CollegeofPlantProtec

5、tion，NanjingAgricul-ruralUniversity~KeyLaboratoryofIntegratedManagementofCropDiseasesandPests，Minist~ofEducation，Nanjing210095，China；3．ChongqingFul—ingDistrictInstituteofAgriculturalSciences，Chongqing408000，China)Abstract：Amutantlibrarywasconstructedbymar／her，apromoter—freetransposon，inPectobacter

6、teriumcarotovorumsubsp．caroto't)orlln(Pcc)strainPccS1．OnlyonemutantPM_5Wasobtainedafterinductionandidentification．ThetransposoninsertionsiteWOSidentifiedasanubiGgenecedingubiquinonebiosynthesisO—methyhransferase．ThegenedeletionmutantAu—biGWasfurtherconstructedbyhomologuerecombination．Comparedtllth

7、ewildtypePccS1．thepathogenicitiesofAubiGtovarioushostplantswereweakened，withhalvedlesionareasincoloredcallaandeallalily，and20％lesionareainChinesecab一bage．AubiGpresentedacceleratedsedimentation，halvedbiofilmandzer