酶性质——最适pH选择.doc

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1、生物化学实验报告题目：酶性质——最适pH选择姓名：学号：班级：时间：一、实验原理：酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH。高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适pH也不同，如胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.5，胰蛋白酶的最适pH为8。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4~6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。二、实验试剂：1.0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液；2.用0.2m

2、ol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制pH分别为5.4，6.0，6.4，6.8，7.2，7.6，8.0的缓冲液。表1各pH值的缓冲液所需两种溶液配比pH值5.46.06.46.87.27.68.00.2mol/LNa2PO4/ml11.1512.6313.8515.4517.3918.7319.450.1mol/L柠檬酸/ml8.857.376.154.552.611.270.55三、实验操作：保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。摸准保温时间是实验的关键步骤之一。取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2ml，加入pH6.8磷酸氢二钠—柠

3、檬酸钠缓冲液3ml，及稀释100~300倍的唾液2ml。充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并记时，每隔1min用滴管取1滴混合液，至于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时间。若2~3min内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数，若保温时间超过15min，说明酶活力太低，要提高酶的浓度。最佳保温时间8~12min以内，因此要掌握好唾液淀粉酶的稀释倍数，确定准确的保温时间才能进行下步实验。取7支试管按下表操作，保温时间参考以上操作：表2各试管操作

4、过程试管编号1234567pH值5.46.06.46.87.27.68.00.3%氯化钠0.5%淀粉/ml2222222相应PH缓冲溶液/ml3333333每隔1min加入唾液淀粉酶液/ml2222222充分摇匀，37℃水浴保温，到达保温时间后，每隔1min依次取出立即加入碘液1滴，摇匀/滴1111111记录结果颜色蓝紫黄褐黄淡黄黄褐淡紫蓝紫根据各管呈现的颜色，判断不同pH对淀粉水解和淀粉酶活性的影响，2并确定其最适pH值。一、实验结果：实验得到如图1的结果：图1各试管显色情况（pH由高到低试管颜色分别为蓝紫、黄褐、黄、淡黄、黄褐、淡紫、蓝紫）根据实验结果，可以得出，唾液淀粉酶的最适p

5、H在6.8左右，低于或高于这个pH都会影响其活性。二、结果分析：1.实验结果得到显色的7支试管中，有些相邻试管颜色梯度不明显。原因可能是再配置缓冲溶液时不够精密，导致缓冲液pH有偏差。2.在做不同pH的7支试管实验之前，要先做好预实验。根据情况稀释唾液，确保唾液浓度合理，使得淀粉水解时间在8~12min之间。3.滴加碘液进行显色时，要保证各个试管均滴加相同量的碘液。4.取出的唾液要置于冰水中，以免其因时间过长而失活。2