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1、菌种的培养材料1.1.1菌种枯草芽胞杆菌。1.1.2培养基(1)LB培养基：蛋白月东10g,酵母膏5g,NaCIlOg,蒸懈水1000ml,pH为7,(可溶性淀粉20g)琼脂20go(2)筛选用培养基：含有2%可溶性淀粉的LB培养基。(3)种子培养基:豆饼粉4%,玉米粉3%,Na2HPO40.8%,(NH4)2SO40.4%,NH4CI0.15%,H2Oo(4)发酵培养基：豆饼粉5.6%,玉米粉7.2%,Na2HPO40.8%,(NH4)2SO40.4%,NH4CIO.I3%,CaCbO.13%,a—淀粉酶50g。⑵1.13主要试剂蔗糖、葡萄糖、淀粉、玉米淀粉、麦芽
2、糖、酵母浸出物、胰蛋白陈、牛肉貳尿素、氯化钱、硫酸锚、硫酸镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、氯化钠和氯化钙。1.1.4仪器设备控温摇床、高压蒸气灭菌锅、电子天平、pH测定仪、无菌操作台和紫外分光光度计。1.2方法1.2.1培养基的制备⑴称量按培养基配比依次准确地称取酵母膏、NaCI、蛋白腺放入烧杯中,并在烧杯中加入少量蒸懈水。注：酵母膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯,也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热，酵母膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片⑶。⑵溶化可溶性淀粉溶液的配制方法：将所需克数的可溶性淀粉放入一个小烧杯中
3、，加入少量蒸懈水，搅拌成糊状，然后将糊状溶液均匀倒入少于培养基总体积的沸水中，一边搅拌一边加热,待其溶化成透明状后继续在电炉上加热5分即制成可溶性淀粉溶液。如果配制固体培养基时,将已准备好的可溶性淀粉溶液倒入烧杯中,将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化,补水到所需的总体积。在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按2%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间⑷。在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时,需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时,不能用铜或铁
4、锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影响细菌生长。⑶调pH培养基配好以后,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加Imol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直到pH达7为止；反之，用lmol/LHCI进行调节。对于有些要求pH较精细的微生物，其pH的调节可用酸度计进行⑸。注意：pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度，配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固，因此应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合z或在中性pH条件下灭菌z再调整pHo(4)分装按照实验要求,可将配置
5、的培养基分装入试管内或三角瓶中。液体分装：分装的高度以试管高度的1/4左右为宜;分装三角瓶的量则根据需要而定,一般以不超过三角瓶的一半为宜。固体分装：分装于试管中的应不超过试管的1/5,灭菌后制成斜面；分装三角瓶的量以不超过一半为宜。⑸加塞培养基分装完毕后z在试管口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能。⑹包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，外边再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期。三角瓶加塞后，夕卜包牛皮纸，用麻绳以活结扎好，使用时容易解开，同样注明。(7)灭
6、菌将配置好且包扎完毕的固体、液体培养基及本实验涉及的试管、三角瓶等及400ml纯水于高压灭菌器中以0.14Mpa,121°C条件下高压蒸汽灭菌20分钟。⑻斜面搁置将培养基冷却至5(TC左右时放置斜面，斜面在试管的1/2处为宜，待斜面凝固后，放置于冰箱中待用。1.2.2菌种的筛选与保藏⑴倒平板将实验配制好的培养基加热溶化，待冷却至55-60°C时，倒平板9皿⑹。⑵稀释用接种环取菌种，放入盛90ml无菌水的三角瓶中，振摇。用一支lml无菌吸管吸取lml菌液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取lml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀
7、，以此类推制成1010-2.1010
