灭菌操作规程.doc

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1、灭菌操作规程一、微生物检验器皿的包扎1、目的杀菌前的准备工作2、所用器具(1)、棉花(2)、橡胶塞(3)、牛皮纸或报纸(4)、棉绳3、操作方法(1)、试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁丝框。(2)、吸移液管：将吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用纸包起来，或用盒装。(3)、三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口用棉塞塞好，或塞上橡胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。(4)、玻璃洗瓶：将玻璃洗瓶瓶口用棉塞或橡胶塞塞好，用牛皮纸把塞头部包起来。(5)、磁性漏斗：用牛皮纸

2、或报纸将磁性漏斗整个包扎起来。(6)、平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹或盒装。二、高压蒸汽灭菌1、适用范围本法适用耐湿热器具的灭菌如：(1)、易分解的、耐热性的培养基(2)、耐热性好的玻璃器皿(3)、橡胶(4)、耐热性塑料2、原理利用1.5kgf/cm2，121℃的饱和蒸汽，灭菌20分钟。4、仪器和设备高压灭菌锅5、操作方法(1)、包装a.装入培养基的（箱）瓶用螺旋盖盖上，容器用棉塞塞住，再用牛皮纸包扎。螺旋盖应微松。b.在瓶中的培养液不要超过1L，否则灭菌不彻底。c.容器的上部应留有足够的空间，以便产生气泡。d.器具用牛皮纸包

3、裹，放入灭菌袋中。e.器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。f.各类器具装入釜内时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。(2)、高压杀菌a.在灭菌器内加入适量的水（不得低于釜底指示横片，露出加热盘管），放入需灭菌物品，盖上内盖，拧紧外盖上的螺栓。拧紧时要注意对称的进行，否则容易造成漏气。b.开始加热前，将排气阀打开。c.待温度上升至100oC时（即当所有的冷空气已排出时），关闭放汽阀门，使压力上升至1.05kgf/cm2（15磅/英吋2），在此压力下维持20分钟。注意：加热时间不要过长，但也不要低于指定的20分钟。(3)、断

4、开电源。(4)、排气阀关闭的状态下，让釜内压力自然下降。(5)、打开高压杀菌锅。注意必须使灭菌釜内无压力为宜。(6)、灭菌后的物品冷却至室温，取出。(7)、打开出水阀门，放尽釜内剩水。6、注意事项高压灭菌器上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得随意调节。三、干热灭菌1、目的保持在干燥状态下的玻璃器皿和金属的灭菌。2、适用范围本法适用以下的物品：(1)、干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）(2)、金属器具（镊子等）(3)、粉状物品(4)、瓷器3、原理在160oC干热空气中灭菌2小时。4、仪器和设备电热干燥箱5、操作方法(1)、器具用

5、牛皮纸或灭菌袋包（装）扎，放入金属容器内。(2)、器具在干燥箱加热前放入，每个器具之间留有足够的空隙，使热空气能畅通。(3)、关闭箱门接通电源，打开通气孔，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。(4)、加热至160℃，保持2小时。(5)、切断电源，冷却至60℃时，打开箱门，取出灭菌器具，并打开箱顶通气口。6、注意事项(1)、灭菌时必须注意温度不能超过180℃，以免使棉花、报纸烘焦。(2)、灭菌时不得打开箱门。(3)、干燥箱未冷却时，不要取出里面器具，防止内外温差过大造成玻璃器具爆炸。四、紫外线灭菌1、目的无菌室内的台

6、面和空气的灭菌。2、原理紫外灯发出的紫外线波长为200—300nm之间，具有杀菌能力。波长为265—266nm时，杀菌力最强。由于紫外线的作用光谱和核酸的吸收光谱相一致，作为遗传物质的DNA能强烈的吸收紫外线，从而诱导形成胸腺嘧啶二聚体，抑制DNA的复制，达到菌体致死的目的。3、操作方法(1)、开紫外灯前，可以在室内喷洒酚溶液。一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面可以杀死一部分细菌和芽孢。(2)、开紫外灯前，室内桌面、椅子等可用消毒液擦洗，以加强紫外灯的灭菌效果。(3)、开紫外灯照射20—50分钟后，关掉紫外灯。(4)

7、、30分钟后进无菌室进行操作。