免疫细胞分离技术.doc

《免疫细胞分离技术.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、淋巴细胞的分离取肝索抗凝血1ml加Hanks液1ml稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2ml淋巴细胞分离液的试管内（注意勿与分离液混合，然后2000r/min水平离心20min,管内分为4层,白上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞（图2-1）。用毛细管伸至单个核细胞层屮（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r/min离心lOmin,最后用RPMII640培养液将细胞配成2xl06/ml的细胞悬液备用。T细胞及B细胞的分离将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱,B细胞粘附于尼龙棉上,T

2、细胞则不粘附，先用RPMII640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤岀粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMII640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱（衆料管）的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。CD4细胞及CD8细（DCD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMII640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85%的CD4细胞。（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG（浓度为lOpg/ml）包被一平1111表面，然后放置

3、4°C过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞（细胞浓度为lxl07/ml）3ml加入上述的平1111内，4°C放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入lOmlPBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMII640培基屮备用。CD4细胞亦可用此法分离。单核巨噬细胞的分单核巨噬细胞有粘附删料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液（如实物动物的腹腔液）加入适当大小的數料或玻璃平皿内，置于37°CC02温箱内温育1小时，然后用R

4、PMI1640培基轻轻漂洗平1111表血，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度校高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。