北京市大学生化学实验竞赛 实验指导书

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1、北京市大学生化学实验竞赛藏茵陈总黄酮的提取纯化和分析实验指导书（（草稿（草稿）单位：中央民族大学通讯地址：北京市海淀区中关村南大街27号时间：2009年10月18日1藏茵陈总黄酮的提取纯化和分析图1藏茵陈药材藏茵陈来源于龙胆科獐芽菜属植物川西獐芽菜（Swertiamussotii）的全草。藏茵陈是生长在高寒地区的传统藏药，为藏药八珍之一，在青藏高原几乎家喻户晓。在我国主要分布于西藏、青海、四川等海拔3000～4800m的地区。这种生长在高寒雪域地带的天然药物，在藏医药经典著作《晶珠本草》、《藏药晶镜本草》等典籍中均有记载，藏药名称为“蒂达”，藏医认为藏茵

2、陈具有清热消炎、利胆退黄的功能，主治各种热病，尤其对肝胆实热性疾病具有独特疗效。现代医药经典著作《百科全书·藏医分卷》中也汇集了历代以藏茵陈命名的著名方剂共十余方，其中八味藏茵陈散、二十五味藏茵陈散均属临床常用且疗效十分显著的方剂。近些年来以藏茵陈为主要原料经现代工艺加工制备的藏药新药有晶珠肝泰舒胶囊、蒂达丸、藏茵陈片/胶囊、急肝宁、乙肝宁等，均应用于临床主要用以治疗急慢性肝炎、胆囊炎等，疗效十分显著。藏茵陈中含有口山酮、三萜、皂苷等多种化学成分，主要有獐芽菜苦苷、1,5,8-三羟基-3-甲氧基口山酮、1,8-二羟基-3，7-二甲氧基口山酮、1,3,8-

3、三羟基-7-甲氧基口山酮、1-羟基-3,7-二甲氧基口山酮（1-droxy-3,7-dimethoxyxanthone）、1-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基口山酮、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-3,8-二羟基-7-甲氧基口山酮、齐墩果酸等。一一、一、、实验、实验目的1、学习并掌握大孔吸附树脂法富集纯化黄酮类化合物的原理和方法；2、学习并掌握紫外分光光度法测定药物中主要成分含量的方法；3、巩固溶剂提取法和萃取法的原理和方法；4、得到藏茵陈总黄酮，进行鉴定并测定其中主要成分的含量。2二二、二、、实验原理、实验原理1、黄酮类化

4、合物的结构、性质、紫外吸收特征和提取分离方法黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，分子结构中含有两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结，形成C6-C3-C6的基本骨架。天然药物中广泛含有黄酮类化合物，具有扩张冠状动脉、增加冠脉流量、影响血压、改变体内酶活性、改善微循环、解痉、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等具有重要生物活性，有很高的药用价值，已经证明该类化合物是许多天然药物的有效成分。藏茵陈中含有大量的黄酮类化学成分，其中主要为口山酮类成分。黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的盐，常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别，本实

5、验采用盐酸-镁粉反应进行鉴别。TLC法也用于黄酮类化合物的鉴定，常用硅胶薄层色谱，用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物较好。常用的展开剂为氯仿-甲醇（8.5∶1.5）、甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5∶∶41）等，可以根据待分离成分极性的大小适当地调整比例。黄酮类化合物具有特征性的紫外吸收光谱，可用于黄酮类化合物的鉴定及含量测定。本实验采用《药典》2005年版附录中的紫外可见分光光度法，以1，8-二羟基-3，7-二甲氧基口山酮为标准品，测定样品在410nm处的吸光度，计算样品中黄酮的含量，对藏茵陈总黄酮有效部位中的黄酮含量进行测定。2、溶剂提取法和萃取法的原理和方法

6、溶剂提取法是根据被提取成分在溶剂中的溶解性能，选用对被提取成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，将被提取成分从天然产物组织内溶解出来的方法。本实验选用乙醇为溶剂，因为它能与水按任意比例混合，又能和大多数亲脂性有机溶剂混合，渗入植物细胞能力较强，能溶解大多数化学成分，也是溶剂提取法的常用溶剂。本实验提取方法选用回流提取法，此法在回流装置中加热进行，以免溶剂挥发损失，提取效率较高。本实验采用萃取法进行脱脂处理，除去乙醇提取液中的叶绿素等脂溶性杂质。两相溶剂提取简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。3、大

7、孔吸附树脂法富集纯化黄酮类化合物的原理和方法大孔吸附树脂是一种亲脂性物质，是一种不含交换基团的、具有大孔结构的高分3子吸附剂，可以有效地吸附具有不同化学性质的各种类型化合物，适用于从水溶液中分离低级性或非极性化合物，组分间极性差别越大，分离效果越好。混合组分在大孔树脂吸附后一般依次用水、含水醇或丙酮（不同体积分数）洗脱，可以去除水溶性杂质富集弱极性成分。本实验选用AB-8型大孔吸附树脂，为弱极性吸附树脂，对黄酮类化合物具有良好的选择性，将极性样品液通过树脂柱可很好的除去其中的亲水性杂质（氨基酸、碳水化合物等）。大孔吸附树脂具有选择性好、机械强度高、再生处

8、理方便、吸附速度快等优点。三三、三、、实验、实验仪器和试剂1、仪器：电热套，回流