禽流感病毒LAMP快速诊断方法的建立-论文.pdf

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1、浙江农业学报ActaAgriculturaeZhefiangensis，2014，26(3)：576—580http：／／www．zjnyxbCn王辰雨，胡敬东，史玉颖，等．禽流感病毒LAMP快速诊断方法的建立[J]．浙江农业学报，2014，26(3)：576．580．DOI：10．3969／j．issn．1004-1524．2014．03．07禽流感病毒LAMP快速诊断方法的建立王辰雨，胡敬东，史玉颖，宋敏训，，张鹤晓，(山东农业大学动物科技学院泰安271000；山东省农业科学院家禽研究所济南250023；北京检验检疫局技术中心

2、北京100026)摘要：参考禽流感病毒(AIV)基质蛋白(M)基因设计了两对引物，特异性识别其6个不同位点，建立了基于颜色判定的环介导等温扩增反应(LAMP)方法。试验对不同禽源病毒进行了测试，结果发现该方法仅特异性地检出禽流感病毒(H9和H5亚型)核酸，对AIV病毒的检测极限为10EID人工感染病料检测结果与鸡胚病毒分离法的符合率为96．7％。数据表明，建立的LAMP方法特异、敏感、简便，在禽流感的诊断中具有很大的临床应用潜力。关键词：禽流感病毒；基质蛋白基因；环介导等温扩增反应中图分类号：S851．347．2文献标志码：A文章

3、编号：1004—1524(2014)03—0576-05Establishmentofrapidloop-mediatedisothermalamplificationmethodfordetectionofavianinfluenzavirusWANGChen．yu，HUJing—dong，SHIYu．ying，SONGMin．xun'，ZHANGHe．xiao，(ShandongAgriculturalUniversity，Taian271000，China；InstituteofPoultryScience，Shandong

4、AcademyofAgriculturalScience，n0n250023，China；BeifngInspectionandQuarantineTestingCenter，Beijing100026，China)‘Abstract：WithreferencetOthematrixproteingeneofAvianInfluenzaVirus(AIV)，wedesignedtwopairsofprimerstospecificallyrecognizeitssixdifferentsites，andestablishedthe

5、Loop—mediatedIsothermalAmplificationReaction(LAMP)methodbasedonthedeterminedcolor．Withdifferentavianvirusestested，theresultsshowedthatthemethodonlyspecificallydetectedAIV(H9andH5subtype)nucleicacids，andthedetectionlimitforAIVwas10EID50．Wealsodetectedthesamplesforartif

6、icialinfectionsanddiscoveredthatthecoincidencerateofLAMPtothevirusisolationwas96．7％，Theexperimentaldatademonstratedthattheestablishedmethodswerespecific．sensitive，andsimple，whichhadgreatpotentialforclinicalapplication．Keywords：avianinfluenzavirus；matrixproteingene；loo

7、p—mediatedisothermalamplification禽流感的临床症状和病理变化因感染禽的等不同而表现不同¨J。因此禽流感诊断必须依种类、年龄、病程长短、并发感染及感染毒株毒力赖于病原鉴定、血清学和分子生物学技术等。病毒分离、RT—PCR及荧光定量RT．PCR方法相继收稿日期：20131l-19用于禽流感病毒的检测，但这些方法均因确诊时基金项目：“山东省现代农业产业技术体系项目资助”，质检公间过长、仪器设备要求高等，很难满足快速、简益性行业科研专项(201010067)作者简介：王辰雨(1988一)，男，山东省济南市人

8、，硕士研究生，便、经济的临床需求J。环介导等温扩增反应研究方向为动物传染病。E—mail：milan8804@163．con(1oop-mediatedisothermalamplification，LAMP)技$通讯作者，宋敏训，E-mail：m