碱性蛋白酶水解豆粕制备大豆多肽-论文.pdf

《碱性蛋白酶水解豆粕制备大豆多肽-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第34卷第6期华侨大学学报(自然科学版)Vo1．34No．62013年11月JournalofHuaqiaoUniversity(NaturalScience)Nov．2013文章编号：1000—5013(2013)06—0674—04doi：10．11830／ISSN．1000—5013．2013．06．0674碱性蛋白酶水解豆粕制备大豆多肽黄雅燕，王文平，肖美添(华侨大学化工学院，福建厦门361021)摘要：采用碱性蛋白酶水解豆粕制备大豆多肽，以蛋白质的转化率和水解度为指标，通过单因素试验，考察影响酶解工艺的主要因素，

2、并利用正交试验确定最佳酶解条件．结果表明：在温度为55℃，pH值为9．5，加酶量为0．15，底物质量分数为7的最佳条件下，水解豆粕3h，其转化率可达75．73，水解度为49．30．液相色谱分析表明：酶解液的大豆多肽相对分子质量分布主要集中在5000以下，占比达80．21．关键词：豆粕；大豆肽；碱性蛋白酶；转化率；水解度中图分类号：Q516文献标志码：A豆粕是大豆加工生产豆油的副产品，约含45～5OYo的大豆蛋白质，有很高的开发和利用价值[．由于大豆蛋白分子量大、不易吸收，而且存在多种抗营养因子，目前主要用作饲料，在食品方面

3、应用极少．大豆多肽是由大豆蛋白经蛋白酶水解生成的低分子肽混合物．研究表明：大豆多肽具有低黏度、高稳定性等优良加工特性，以及降低血清胆固醇、降血压和促进脂肪代谢等独特的保健功能，是一种比较理想的新型大豆深加工产品_2_3_．近年来，采用酶法水解豆粕制备大豆多肽的研究日渐增多，但大多以水解度为唯一考察指标，且水解度普遍不高[4]．本文采用碱性蛋白酶水解豆粕粉，以转化率和水解度为考察指标，通过单因素和正交实验，确定最佳酶解工艺条件，并测定大豆肽的相对分子质量分布．1材料与方法1．1材料与试剂豆粕(粗蛋白的质量分数为43．4％0，

4、粗脂肪的质量分数1．46，水的质量分数l1．35，福建省福海粮油公司提供)；碱性蛋白酶(酶比活力为7．42mkat·g～，广西南宁庞博生物工程有限公司)；细胞色素C(Mr一12500)、抑肽酶(Mr一6511．44)、杆菌肽(Mr一1422．69)、Val—Tyr—Val(Mr一379．5)和Gly—Tyr(Mr=238．2)(美国Sigma公司)；三氟乙酸、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯．1．2仪器WatersLC-2998型高效液相色谱仪(美国Waters科技有限公司)；TP一214型电子天平(美国丹佛仪器有限公司

5、)；UV一1800型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)．1．3方法1．3．1样品及其制备将豆粕粉碎，过6O目筛，备用．1．3．2碱性蛋白酶水解豆粕按照一定的底物质量浓度准确称取豆粕于水解反应器中，加入适量蒸馏水，搅拌均匀．用1．0mol·L的NaOH调节溶液酸碱度至所需的pH值，准确量取一定量的碱性蛋白酶加入水解反应器中，反应过程控制系统保持在要求的pH值．反应至预定时间后，调节酶解液的pH值至4．5，使未水解的蛋白质沉淀．在沸水浴条件下，高温灭活5min，冷却，离心(4000r·min～，2Omin)，取上清液

6、，待测．收稿日期：2012—10—10通信作者：黄雅燕(1979一)，女，讲师，主要从事生物转化和生物合成的研究．E-mail：yyhuang@hqu．edu．on．基金项目：福建省泉州市科技计划项目(2010N11)第6期黄雅燕，等：碱性蛋白酶水解豆粕制备大豆多肽1．3．3分析方法蛋白酶活力测定按照SB／T10317—1999福林一酚法；粗蛋白含量测定按照GB5009．5—2O10凯氏定氮法；蛋白质含量的测定按照紫外光吸收法[；转化率(尺)[73、水解度(DH)测定均按照茚三酮显色法L8j．1．3．4相对分子质量分布大豆

7、肽相对分子质量分布采用高效液相色谱(HPLC)法测定．色谱柱为SRTSEC一100(7．8minx300mm)；流动相为V(乙腈)：V(水)：V(TFA)=20：80：0．1；UV检测波长为220nm流速为0．5mL·rain～；柱温为30℃；进样量为10肚L．采用已知相对分子质量的细胞色素C(Mr一12500)，抑肽酶(Mr一6511．44)，杆菌肽(Mr一1422．69)，Val—Tyr-Val(Mr=379．5)，Gly-Tyr(Mr=238．2)作为对照品，进行HPI分析．相对分子质量校正的线性回归方程为：lgMr

8、一4．971-0．0775t(r=0．9955)．2结果与讨论2．1最佳酶解条件按照酶解工艺，以蛋白质的转化率和水解度为指标，考察温度()、pH值、底物质量分数(ccJ(底物))和加酶量((酶))等因素对酶解过程的影响，结果如图1所示．由图1可以看出：各个因素对酶解反应过程都有一定的影响，温度为5O℃、