atp-生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测方法的应用探讨

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1、中国民族民间医药学术探讨·28·ChinesejournalofethnomedicineandethnophannacyAcademicstudyATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测方法的应用探讨王钰莹罗清胡康刘颂张霓霓余丽梅¨l

2、遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室，贵州遵义563003；2．遵义医学院附属医院肿瘤医院，贵州遵义563003；3．遵义医学院附属医院甲状腺乳腺外科，贵州遵义563003；4．遵义医学院附属医院妇科，贵州遵义563003；5．遵义医学院附属口腔医院，贵州遵

3、义563003【摘要】目的：探讨ATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测方法的可行性和准确性。方法：通过开展ATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测的117例标本的肿瘤细胞提取培养、细胞学鉴定及药物敏感性检测结果进行分析，为以后开展该项检测提供技术依据。结果：组织标本和浆膜腔积液标本在体外均可分离培养出肿瘤细胞，ATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测方法可行，结果准确，有较高的临床符合率。结论：开展ATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测对临床治疗用药具有重要的指导意义。【关键词】肿瘤细胞；药物

4、敏感试验；可行性【中图分类号】R969．3【文献标志码】A【文章编号】1007—8517(2013)23—0028—03化学治疗是治疗恶性肿瘤的三大治疗手段之一，由于肿瘤患者存在个体差异及肿瘤的异质性，肿瘤对各种化疗药物存在着明显的个体差异l2，特别是肿瘤复发和经过多次化疗的患者。因化疗前缺乏患者对化疗药物敏感性和耐因CTX和IFO在体外无活性，实验中所采用的是CTX的体药性的直接检测证据，在制定化疗方案时不可避免地存在内活化物苯丁酸氮芥CLB替代。着一定的盲目性，选择药物不准确。多数化疗药物本身

5、的不良反应可造成对机体的损害，更重要的是可诱导肿瘤细1．3仪器和试剂BHP9504型微孔板发光分析仪(北京滨胞产生多药耐药性，贻误治疗时机，增加医疗成本和患者松光子技术股份有限公司)。ATP生物荧光肿瘤药物敏感性的经济负担。因而在治疗前筛选敏感药物，选择高效、有检测试剂盒，含混合消化酶、培养基、红细胞裂解液、细效药物，进行有的放矢的治疗早已成为研究者和临床医生胞培养板(96孔)、ATP提取液和荧光酶一荧光素工作液关注的重要问题。(北京金紫晶生物医药技术有限公司)。体外抗肿瘤药物敏感试验的方法及结果

6、准确与否是影1．4体外药敏检测实验响病人治疗方案制订的关键因素。本室对121例开展了1．4．1实体瘤标本制备无菌取得实体瘤手术标本，在含ATP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性的检测，现将检测抗生素的培养基中浸泡25min后，剪成0．5—1mm碎块，情况总结如下。置于50ml离心管中，加用培养基稀释1倍的混合消化酶1材料与方法10ml，于37℃消化2～4h，用培养基洗涤2次，获得单细胞1．1肿瘤标本收集2011年9月至2012年l2月我院121悬液。台盼蓝染色，计数活的肿瘤细胞。例肿瘤患者的标本进行A

7、TP一生物荧光体外抗肿瘤药物敏1．4．2浆膜腔积液标本的制备将肝素抗凝的浆膜腔积液感性检测。其中乳腺癌89例，卵巢癌l6例，子宫内膜癌4标本，400g离心lOmin，去上清，如有大量红细胞(>例，宫颈癌4例，口底鳞癌4例，肺癌3例，非霍奇金淋25％)，加入预冷的10ml红细胞裂解液，冰浴5—10min红巴瘤1例。121例患者，年龄在29～76岁。细胞去除红细胞，再加入20mlRPMI1640培养液，400g离1．2化疗药物化疗药物为100％药物血浆峰值浓度(100％心lO分钟，去上清，加入3～5m

8、l培养基混匀制备得细胞PPC)(见表1)。联合用药的每个药物的浓度与单药浓度悬液。台盼蓝染色，计数活的肿瘤细胞，调整细胞密度于2相同。～4X106个／ml备用。表1化疗药物及剂量1．4．3加待测药物于96孔培养板，每个药物设100％、50％、25％、12．5％和6．25％PPC5个浓度，每个浓度2个平行孔，并设无药对照组(MO)，和最大抑制对照组(MI)。接种所得肿瘤细胞，细胞数为2X104个／孔。在37℃，5％CO：条件下培养5d后，开始测定。最大抑制对照孔加50l最大抑制剂，其余各孔加50~I

9、ATP提取液，在震荡器上震荡30s，室温静置5min。再次震荡?昆匀。每孔取50lxl液体，按相应的位置加到荧光测试板内，每孔加入50t~l荧光素一荧光酶混合液。再次震荡混匀5s，立刻在微孔板发光分析仪上测定荧光强度。1．5药敏检测判定标准计算药物IC90和IC50。IC90<作者简介：王钰莹，女，讲师，硕士，E—mail：wangyuyingangle@163．eom。通信作者：余丽梅，女，教授，博士，E—mail：ylm720@sina．tom。学术探讨中国民族民间医药Acad