TCID50与PFU到底是啥关系.doc

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1、TCID50与PFU到底是啥关系PFU:plaqueformingunit，空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。MOI:multiplicityofinfection，感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfunum

2、ber/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：P=1-P(0),P(0)=e-m或m=-InP（0）。其中：P为被感染细胞的百分率P(0)为未被感

3、染细胞的百分率m为MOI值例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则：P(0)=1%=0.01m=-In(0.01)=4.6pfu/cell。TCID50Protocol：1：制备96孔板单层细胞2：将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复3孔3：每日观察细胞病变，记录高于50和低于50％病变孔的病毒稀释度，4：计算比距，获得TCID50计算比距：（高于50％的病变率－50％）/（高于50％病变率－小于50％病变率）＝比距；比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数。比如：比色计算或者显微镜观察病毒

4、的TCID50在10的负7和8次方之间，那么，指数－8与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50的指数，TCID50=10的-7.几次方病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50(50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半数细胞培养物感染量TCID50（50%tissuecultureinfectivedose)蚀斑形成单位（plaqueformingunit，PFU）PFU/mL=TCID50/mL×0.69二、TCID50的操作步骤

5、1、在离心管中用维持液将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1到10-10,每一次稀释后都需要更换枪头进行下一步稀释。2、将稀释好的病毒接种到已经铺好单层细胞的96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排共8孔，每孔接种100µl；设正常细胞对照(两纵排),只加维持液100µl。4、逐日观察并记录结果,按Reed-Muench两氏法计算TCID50病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50(50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedo

6、se)半数细胞培养物感染量TCID50（50%tissuecultureinfectivedose)蚀斑形成单位（plaqueformingunit，PFU）PFU/mL=TCID50/mL×0.69二、TCID50的操作步骤1、在离心管中用维持液将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1到10-10,每一次稀释后都需要更换枪头进行下一步稀释。2、将稀释好的病毒接种到已经铺好单层细胞的96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排共8孔，每孔接种100µl；设正常细胞对照(两纵排),只加维持液100µl。4、逐日观察并

7、记录结果,按Reed-Muench两氏法计算TCID50TCID50与PFU换算:PFUs＝0.7×TCID50的滴度为什么病毒载体的感染单位有不同的表示方法？不同的病毒载体，其表示感染单位的方式有所不同。早期的逆转录病毒载体一般用CFU，是“cloneformingunit”的简称，叫做“克隆形成单位”。感染性滴度的单位一般表示为CFU/ml。这是因为最早的逆转录病毒系统是Dr.DustyMiller建立的LN系列（包括LN，LXSN，LNSX，LXCN，LNCX等），包装细胞株是PA317,psi2，G&P86等。在这套载体

8、中N代表了neo基因，X代表外源基因，S代表SV40启动子，C代表CMV启动子，L代表逆转录病毒的LTR，具有启动子功能。因此，早期的LN系列载体是双表达载体，重组病毒中有neo基因的表达单位，滴度测定时用病毒感染NIH3T3细胞，用G418选择培养，根据形成n