病毒诱导的基因沉默技术（VIGS）在豌豆基因功能研究中的应用-论文.pdf

《病毒诱导的基因沉默技术（VIGS）在豌豆基因功能研究中的应用-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2013，41(29)：11612—11614责任编辑石金友责任校对卢瑶病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)在豌豆基因功能研究中的应用徐雷，姜波(1．江苏新天地生物肥料工程中心有限公司，江苏宜兴2142oo；2．常熟理工学院生物与食品工程学院，江苏常熟215500)摘要病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)是近年发展起来的一种通过抑制基因转录研究植物基因功能的快速方法，豌豆早褐病毒(PE—BV)的VIGS技术已经被成功的应用于豌豆发育调控基因功能的研究。该文在概述VIGS

2、原理研究进展的基础上，对基于PEBV的VIGS技术流程进行总结，并提出改善其缺陷的方法和合理的数据分析处理方式，认为基因的沉默效率与基因在调控网络中的位置，上下游基因的影响及基因间的功能冗余有关。关键词VIGS；PEBV；豌豆；基因功能中图分类号$643．3文献标识码A文章编号o517—6611(2013)29—11612—03ApplicationofVIGSinResearchofGenesFunctioninPeaXULeietal(JiangsuXintiandiBiologicalFertilizerEnginee

3、ringCenterCo．Ltd，Yixing，Jiangsu214200)AbstractVirusinducedgenesilencing(VIGS)techniquecomesforthinrecentyears，anditisarapidmethodtostudygenefunctionsbysuppressgenetraascription．Basedonpeaearlybrowningvirus(PEBV)，theVIGStechniquehasbeenusedverywellinresearchofpeade—

4、velopmentregulationgenesfunction．TheVIGSbasedonPEBVprocesswassummarizedafterhavingsurveyedtheresearchprogressofVIGSprinciple，andthemethodsofimprovingitsdefectsandmethodofhandlingdatawereproposed．Thereisrelevanceofgenesilencingeficiencytotheplaceingenesregulationnet

5、works，upanddownstreamgeneseffectandredundancybetweengenesfunction．KeywordsVIGS：PEBV；Pea；Genefunction豌豆是最早用于经典遗传学研究的植物之一，也是一种个RNA和DNA病毒的21bpsiRNA形成。DCL4缺失时，重要的经济作物。但是在遗传学研究进入分子水平之后，因DCL2和DCL3催化产生22和24bpsiRNA。DCL1催化双生为其基因组大，结构复杂，突变体相对较少，转基因技术开发病毒和花椰菜病毒siRNA的产生。siRNA由

6、植株的RdRp晚且周期长，对其开花分子作用机制的研究远远滞后于其他扩增，如CMV(Cucumbermosaicvirus)需要RDR1和RDR6植物，对豆目植物基因组学研究以及豌豆中病毒诱导的基因(即SDE1／SGS2)扩增。至今还无数据能清晰地说明来自病沉默(VIGS)技术的出现弥补了这些不足。病毒诱导的基因毒的siRNA积聚模式和病毒被抑制的机制，可能是以类似沉默技术(VIGS)是近年发展起来的一种通过抑制基因转录PCR的方式扩增。这是强化阶段(即secondaryVIGS)。最后研究植物基因功能的方法，已经初步应用于基

7、因功能研是系统传播阶段，通过细胞间和韧皮部传导病毒信号，该究。但是对VIGS技术的缺陷和数据处理并无具体的应对方信号可能是siRNA或者其他起始阶段产物。法。PEBV的VIGS技术已经在豌豆发育调控基因功能的研RISC(RNA—inducedsilencingcomplex)的核心组分是Ar_究中取得了一些成果。笔者对VIGS技术缺陷和数据处理方gonaute蛋白，具有PAZ和PIWI2个主要结构域，PAZ是法进行探讨，并进行改善，以期为VIGS的进一步应用提供RISC中siRNA的结合位点，PIWI负责对靶RNA的特异性切

8、依据。割]。在植株细胞质中，RISC结合siRNA中的一条链，形1VIGS原理研究成激活态的RISC，降解互补的目标基因mRNA，导致目标“VIGS”最早是由A．vanKammen描述病毒感染植株恢基因沉默，植株产生沉默表型，从而判断目标基因的功能。复正常的现象，但是该名词现在已经被专一应