灵活使用hplc的技巧-20120418郑州

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1、灵活使用HPLC的技巧灵活使用HPLC的技巧天美（中国）科学仪器有限公司甄蕊目录1普通液相色谱的技巧2日常维护的技巧031.普通液相的技巧1.1混合方法不同，保留时间的变化1.2放置时间不同，流动相组成的变化1.3溶液组成不同，混合难易选择混合器1.4试剂级别不同，对色谱图的影响1.5样品稀释剂与进样量的选择1.6色谱柱的性能与预柱1.7柱温箱性能对基线的影响1.8基线问题1.9使用离子对试剂，峰形产生的变化041.普通液相的技巧1.1混合方法不同，保留时间的变化1.2放置时间不同，流动相组成的变化1.3溶液组成不

2、同，混合难易选择混合器1.4试剂级别不同，对色谱图的影响1.5样品稀释剂与进样量的选择1.6色谱柱的性能与预柱1.7柱温箱性能对基线的影响1.8基线问题1.9使用离子对试剂，峰形产生的变化051.1混合方法的不同，保留时间的变化如何调配「HO：CHCN=50：50」？23×纯水100mL，以乙腈定容到200mL。→HO：CHCN≒50：5323×乙腈100mL，以纯水定容到200mL。→HO：CHCN≒53：5023○分别称取100mL纯水和100mL乙腈，然后混合。（如右图）061.1混合方法的不同，保留时间的变

3、化60以乙腈定容H2O:CH3CN=50:5040以纯水定容mAU200051015202530min色谱柱HitachiInertsilODS-3(4.6×250mm,5um)进样量20μL温度40℃样品DNPH-乙醛[5mg/L]流量1mL/min波长360nm071.普通液相的技巧1.1混合方法不同，保留时间的变化1.2放置时间不同，流动相组成的变化1.3溶液组成不同，混合难易选择混合器1.4试剂级别不同，对色谱图的影响1.5样品稀释剂与进样量的选择1.6色谱柱的性能与预柱1.7柱温箱性能对基线的影响1.8基

4、线问题1.9使用离子对试剂，峰形产生的变化081.2放置时间不同，流动相组成的变化放置时间不同，流动相组成发生变化的主要原因1.低沸点试剂的挥发乙腈、甲醇、TFA、甲酸、醋酸等2.因为「1」中等物质体积的减少，导致盐浓度上升3.由空气中混入其他物质灰尘、水分、二氧化碳等091.2放置时间不同，流动相组成的变化手动混合纯水和乙腈25调配当天0开盖，3天后mAU-25-50未开盖，3天后-75101112131415161718min色谱柱HitachiInertsilODS-3(4.6×250mm,5um)进样量10

5、μL温度40℃样品DNPH-乙醛[10mg/L]流量1mL/min波长360nm流动相HO:CHCN=50:5023101.2放置时间不同，流动相组成的变化以四元梯度单元混合纯水和乙腈4020调配当天0mAU-20开盖，3天后-40101112131415161718min色谱柱HitachiInertsilODS-3(4.6×250mm,5mm)进样量10μL温度40℃样品DNPH-乙醛[10mg/L]流量1mL/min波长360nm流动相HO:CHCN=50:50当流动相中不添加盐或挥发性酸时可以这么操作231

6、11.普通液相的技巧1.1混合方法不同，保留时间的变化1.2放置时间不同，流动相组成的变化1.3溶液组成不同，混合难易选择混合器1.4试剂级别不同，对色谱图的影响1.5样品稀释剂与进样量的选择1.6色谱柱的性能与预柱1.7柱温箱性能对基线的影响1.8基线问题1.9使用离子对试剂，峰形产生的变化121.3溶液组成不同，混合难度的差异添加TFA(三氟乙酸)的目的？・与亲水性的碱性物质形成离子对，更易保留在色谱柱上。・由于流动相呈酸性，减弱因为碱性物质的峰与填料中的羟基造成的拖尾现象。使用TFA时的注意点・如果有机溶剂的

7、浓度较低，TFA也会保留在色谱柱上。→可能会检测出鬼峰。・在低波长区域，有UV吸收。→背景值会变高。・挥发性大→流动相的组成会不断变化。131.3溶液组成不同，混合难度的差异H2O:CH3CN=50:50手动混合后输液以低压梯度单元与静态混合器，边混合边输液0.100.100.050.050.000.00mAUmAU-0.05-0.05-0.10-0.100.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.00.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0minmin流量1mL/min

8、反应盘管0.1mmI.D.x3m管路检测波长210nm141.3溶液组成不同，混合难度的差异0.05%TFA/H2O:0.05%TFA/CH3CN=50:50手动混合后输液以四元梯度单元与静态混合器，边混合边输液0.100.100.050.050.000.00mAUmAU-0.05-0.05-0.10-0.100.00.51.01.52.02.53.03.5