ISO15189实验室认可中临床微生物检验要点举例分析.pdf

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1、ISO15189实验室认可中临床微生物检验要点举例分析首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心苏建荣主要内容第一部分ISO15189实验室认可要点第二部分实验室生物安全要点（含最新修订的“医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明GuidanceintheFieldofClinicalMicrobiology”2011年6月）第一部分ISO15189实验室认可要点5.1人员（转一圈，聊一聊）5.1负责人：3年痰涂片：质量（回答问题），既是人员也是检验前在生物安全柜中（现场检查），也是安全Hodge试验（霍奇

2、试验）常规？Multi-DrugResistanceMDR什么是MDR/PDR？摘自天津胡志东稿什么是MDR/PDR？MDR（多重耐药）指细菌对包括头孢菌素类、青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类、碳青霉烯类等在内的抗生素中的至少2-3类耐药。PDR（泛耐药）指细菌除对粘菌素、舒巴坦可能敏感外，对临床上常见的抗生素全部耐药，PDR是MDR中的特殊类型。哪些细菌容易发生MDR和PDR？非发酵菌产ESBLs菌产KPC菌铜绿假单胞菌产NDM菌MRSA不动杆菌属肺炎克雷伯菌大肠埃希菌等产KPC酶（A类碳青霉烯酶）细菌的检测CLSIstan

3、dards-2009碳青霉烯类（15）对一种或多种头孢菌素III亚类中药物耐药的肠杆菌科细菌可能产生碳青霉烯酶，导致对碳青霉烯类MIC升高或抑菌环直径减低，尽管MIC或抑菌环直径值可落在当前敏感范围内。附录G描述了检测碳青霉烯酶方法，用MIC或抑菌环直径判断界值作为筛选试验，改良Hodge试验作为确证试验。变形杆菌、普罗威登斯菌和摩根菌通过非产碳青霉烯酶机制可提高对亚胺培南的MIC值；因此，亚胺培南MIC筛选试验检测这三个菌属产碳青霉烯酶的有效性还没有被确定。B厄他培南10μg≥1916-18≤15≤24≥8B亚胺培南

4、10μg≥1614-15≤13≤48≥16B美洛培南10μg≥1614-15≤13≤48≥16碳青霉烯类（续）对由这些分离菌引起的感染患者，应通知临床经治医师和感染控制人员，考虑选用其他抗菌药物。初筛试验--2009、2010初筛试验--2011天津医科大学总医院执行ModifiedHodgeTest(MHT)试验时机?初筛试验阳性和和对III亚类头孢菌素（如头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟和头孢曲松）中一种或多种药物耐药改良Hodge试验耐药基因检测PCRPCR扩增：结果判读反应体系(25μL)：dNTP2μL

5、、引物各0.5μL、模板0.5μL、Taq酶0.25μL、10×PCR缓冲紫外灯下观察液2.5μL、去离子H2O18.75μL。出现特异性条带PCR条件：94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环后72℃延伸10min。琼脂糖凝胶电泳基因检测结果M1231500900920bp700500400200100注：M为DNAmarker,1.KPC阳性对照菌；2.临床分离肺炎克雷伯菌；3.阴性对照ATCC25922图2肺炎克雷伯菌bla基因PCR扩增产物电泳图KPC-2小结：KPC（Hodge试验）纸片初

6、筛阳性+III亚类头孢菌素一种或多种耐药+初筛阳Hodge-+报告：MIC测MIC临床可用MIC：I/RMIC：S1.报告MIC报告：MIC2.说明：产碳青霉烯酶，疗效不定临床不用3.该方法检测肠杆菌科菌产碳青霉烯酶的敏感性和特异性大于90%4.对少量金属酶细菌敏感性和特异性不定目的：防止碳青霉烯类抗菌药物敏感时，因酶而耐药5.2设施环境5.2.1.1实验室设施符合等级要求要有评估评估程序及依据生物安全（运送与交接）5.2.1.2空间足够（领导）分子生物学要有独立设置三区5.2.2闭门器洗眼设施有消毒及放水日期5.2设施环境

7、5.2.4照明及电源（UPS）5.2.5温湿度（记录）（校准的修正因子）5.2.10病原存放遵守安全条例专人、专地、专记录设备5.3.1设备配置（＊关键技术要求评审原则）无菌体液的直接显微镜检查应具备细胞离心机。5.3.2分析系统校准（＊）-------至少半年检定或校准：浊度仪——至少每年检定或校准：设备包括：生物安全柜（主要是外观、高效过滤器、气流、负压等参数）CO2浓度检测仪细胞离心机压力灭菌、游标卡尺、培养箱、温度计、移液器或自动微量滴定管——满足制造商要求：自动化鉴定仪、血培养仪——记录温度：冰箱、孵箱、

8、水浴、加热块CO2培养箱：记CO2浓度超净工作台：无菌记录压力灭菌锅：化学、生物、定量接种环——制定预防性维护，规划记录的注意生物安全柜、CO2培养箱、自动化鉴定仪、血培养仪、压力灭菌锅、超净工作台、显微镜、离心机5.3.7设备故障分析：A）原因分析B）确定受故障影响的方法学性能C