ELISA法和DNA荧光定量PCR珐检测乙肝病毒的相关性研究.pdf

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1、中国实验诊断学2OO9年7月第13卷第7期·-——957--——文章编号：1007—4287(2009)07—0957—02ELISA法和DNA荧光定量PCR检测乙肝病毒的相关性研究马春宇(辽宁医学院实验诊断学教研室，辽宁锦州121000)乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)DNA定量1．2．1HBV．M的检测检测对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判采用ELISA法。操作及结果判读按试剂说盼断均具有重要意义。随着荧光定量(Fluorescent书。Quantitative，VQ

2、)PCR技术的发展，由于其灵敏、快1．2．2HBV．DNA的FQ．PCR检测速、极低的假阴、假阳性率，该技术在临床上已被广操作步骤：取待测血清标本、阴性对照、弱阳性泛应用于检测HBV．DNA，而酶联免疫吸附试验对照、强阳性对照、阳性标准品100，加入等量(EusA)法检测血清中HBV免疫标志物(HepatitisBDNA提取液混匀，13000rpm离心10分钟后弃上Virus—Marker，HBV—M)仍旧是诊断乙型肝炎的常用方清，加入处理液25l，热浴100oC10min。13000rpm法。本研

3、究采用FQ—PCR法对9l份临床血清标本离心10min，取上清2加入PCR反应管中，阴性对进行HBVDNA定量检测，并与ELISA法测定血清中照、强阳性对照、弱阳性对照及阳性标准品处理方法HBVM的结果进行对比分析。同血清标本。按规定的循环参数进行PCR反应。1材料和方法反应结束后，利用阳性梯度标准品的循环阈值(ct)1．1标本来源及主要仪器和试剂值，制成标准曲线，再根据样品的ct值准确定出起收集2007年5月至l2月间在辽宁医学院附属始DNA的拷贝数。一院检测HBV感染的血清标本共9l份。厦门安普

4、1．2．3统计学方法HBsAg、HBeAg、抗一HBc阳性组利(Amplly)公司的GENELIGHT9800型实时跟踪荧与其它各组的比较以及HBeAg阳性组与HBeAg阴光PCR仪；高速台式离心机(Amplly)；恒温加热器性组的比较均采用检验，以P<0．05作为差异(Amplly)；HBV—M的ELISA检测试剂购自北京万泰有统计学意义的判定标准。生物药业有限公司；HBV．DNA的FQ．PCR检测试剂2结果购自上海科华生物工程股份有限公司。2．1ELISA法检测I-IBV-M和．PCR法检测1．

5、2方法I-IBV．DNA检测结果(见表1)表1ELISA检测ItBV-M和FQ-PCR检测ItBV-I)NA的结果*与“大三阳”组比较DNA阳性率，P：o．024；DNA阳性拷贝数，P：o．0022．2I-IBV．I)NA与ttBe~的相关关系(见表2)染病原学诊断的传统指标，该法简单易行，对判断患3讨论者是否感染HBV以所处阶段有着重要的作用。ELISA法检测血清标本中的HBV—M是HBV感但不能直接反映HBV在患者体内的复制情况，更不二958一ChinJLabDia印，Jtdv，2oo9，V0l

6、13。No．7表2nBeAg分组和FQ-eOt检测HBV-DNA的结果HBeAg阳性组的HBVDNA的检出率明显高于rn~Ag阴性组(PlO5光定量PCR技术克服了常规PCR的缺点，同时也弥的占HBV—DNA阳性的83．3％，而“小三阳”组只占补了传统血清学检测HBV的不足，经过判断患者体20．0％，其DNA拷贝数明显高于“小三阳”组(P<内是否有完整的病毒颗粒的复制来提示患者是否具0．01)，这与国

7、内报道基本一致[，此外，HBeAg阳性有传染性_lj，而且由于可对病毒DNA水平进行定组，其HBV—DNA检出率明显高于HBeAg阴性组(P量，所以对疗效的观察和预后判断非常有帮助。<0．05)。这一结果表明HBeAg阴转，抗．HBe的出本研究通过对91例不同乙肝病毒HBV—M阳性现并不表示患者已无传染性，但传染性减小，仍有部标本同时进行HBV．DNA的FQ．PCR检测，结果发现分患者存在HBV活动性复制，可能属于前C区变异HBV．DNA在各种模式的HBV．M阳性血清甚至全阴的患者_6J，这种变异导

8、致不能产生HBeAg，但不影响性的血清中均可检出，但检出率相差甚大，这个结果HBV的复制与传播，这部分病人仍应为抗病毒治疗提示了不能只依靠HBV血清学检查就判断患者是的对象。否具有传染性2。部分处于感染早期即“窗口”期的综上，判断乙型肝炎患者是否具有传染性方面，患者，病毒复制只在局限组织如肝脏、淋巴结内，血HBV．DNA检测要明显优于血清学指标，但在判断的循环中病毒含量极低【，由于EHSA方法检测HBV．病毒感染分析、疾病进程方面，HBV—DNA阴性并不M的灵敏度较低