绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用.pdf

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1、第31卷第2期同济大学学报(医学版)VO1．3lNO．22010年4月JOURNALOFTONGJIUNIVERSITYfMEDICALSCIENCE)Apr．，2010doi：10．3969~．issnl008—0392．2010．02．029·综述·绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用杨旭津综述，梅炯审校(同济大学附属同济N院骨科．上海200065)【关键词】绿色荧光蛋白；荧光标记；肿瘤基因【中图分类号】R73—3【文献标志码】A【文献编号】1008—0392(2010)02—0107—03自20世纪

2、60年代被发现以来，绿色荧光蛋白上，相关研究经过改进获得了多种变体，其在热稳定(greenfluorescentprotein，GFP)因其化学性质稳性和荧光强度等方面都有所增强，其中在转基因或定、无光漂白现象、用甲醛固定和石蜡包埋亦不影响基因打靶动物研究中应用最广泛的就是增强型其荧光性质等引起科学家的广泛关注。目前，GFPGFP(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)。人基因作为报告基因广泛应用于细胞生物学、分子生们已经获得多种GFP光谱变体，由于它们的谱线轮物

3、学以及临床医学等研究中。廓截然不同且没有重叠，这些变体可以同时在同一生物体内用作报告基因并共同显色，这非常适合体1GFP的研究历史内双标记或荧光能量转移分析等研究。1962年，下村惰等在一种称为Aequoreavictoria2．1用于特定细胞分选的水母体内发现GFP。这种蛋白质在紫外或蓝色波以前，多数分选特殊细胞类型的方法都是采长范围的光照激发下可以发出明亮的绿色荧光。用荧光标记的抗体或者染料标记细胞。用GFP1992年，MartinChalfie在大肠杆菌及线虫体内表达为标记，更容易分离得到表达

4、报告基因的细胞。出GFP蛋白质，显示出亮绿色的荧光．这是首次在用适当的倒置荧光光学设备．能观察到表达荧光水母以外的生物体内成功表达GFP蛋白。在此基础蛋白的活细胞在整个胚胎或成体中的分布状况。上，研究发现GFP在有氧环境下通过氨基酸残基折用酶将成体动物组织或整个胚胎的不同细胞层叠发光，而通过单个氨基酸更换等方法可增强GFP分离，然后进一步制成单细胞悬液，用流式细胞发光的强度及改变发光光谱。仪进行检测，能分选得到标记有荧光蛋白的目的细胞。2GFP在转基因动物研究中的应用目前，研究人员已成功从转基因胚胎

5、中分离得在培育基因打靶和转基因动物研究中．目前的到纯的原生质细胞、神经管细胞及心脏细胞等。同技术已经可以获得在核酸水平的突变品系。在基因时，也有研究证明荧光亮度(强度)与原骨胶原Ⅱ的水平上标记不同的细胞群已成为普遍的研究。与以生物合成是相关的。前使用的细菌B一半乳糖苷酶基因(Lacz)相比，GFP这种从复杂生物结构的多种细胞中分离单种细作为筛选标记具有多个优势：可在体内或体外进行胞的方法用来建立细胞系。可以定义蛋白表达的空实时监测、能采用流式细胞仪、共聚焦显微镜及荧光间区域，还能更容易地研究相关细胞

6、在野生型与突计等技术进行定量检测。在野生型GFP基因的基础变动物中的不同功能。收稿日期：2009—01—15基金项目：国家自然科学基金资助项目(30471760)作者简介：杨旭津(1984一)，男，2003级7年制临床医学生．E—mail：y~cu2@163．com·107·同济大学学报(医学版)第31卷2．2用作多种无创的报告基因血管生成。而前列腺素E可通过基质细胞表面受体过去数年中获得的荧光蛋白变体的荧光激发谱促进VEGF的表达介导血管生成。Ogawa等口定向几乎覆盖了整个可见光的光谱范围。通过

7、改变发色敲除骨髓源基质细胞内前列腺素E受体亚型EP3团共价结构、外部轨道连接等方法可以产生蓝色或的基因，再将产物EP3阴性基质细胞与以GFP基因红色光谱漂移的变体。最近，高苒等⋯将经红色荧光标记的转基因Lewis肺癌细胞混合，发现无论在体蛋白标记的黑色素瘤细胞种植到绿色荧光转基因小外或裸鼠皮下培养，实验组肿瘤荧光组织范围及强鼠皮下，利用活体荧光影像仪和荧光显微镜监测，观度均较对照组明显下降，这表明宿主体内VEGF水察到双色荧光小鼠模型中受体绿色荧光组织和红色平及EP3阳性基质细胞与肿瘤生长及其周围血

8、管荧光移植肿瘤组织相互融合(肿瘤内绿色荧光标生成有重要联系。记来源于受体小鼠的血管和免疫细胞)，直观地观3．1．2在肿瘤细胞凋亡研究中的应用肿瘤抑制察到机体在肿瘤组织刺激下血管形成及免疫反应因子TNF一0【是诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子，而的过程。TGF—B1通过诱导抗凋亡因子TIAF1蛋白，进而目前，GFP基因主要由脂载体和病毒载体转染，抑制肿瘤坏死因子的细胞毒性。研究人员检测由于其安全性一直受到质疑，同时建立周期较长、程GFP—TIAF1蛋白的表达水平，观察对TNF