疫苗工艺设计与处方不当所涉及的风险

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1、报告内容•非限制性核酸内切酶处理细胞DNA后残余量检测的适用性•现行牛血清（蛋白/白蛋白）残留检测方法的使用讨论•疫苗生产用病毒种子的两种鉴别试验适用性讨论•疫苗成分诱IgE的过敏反应–Β-丙内酯作为疫苗灭活剂对人白蛋白的影响–冻干保护剂明胶•二倍体细胞用于不同扩增模式的生产工艺要点讨论•警惕氢氧化铝佐剂的不良反应引言•朱兰质量理论－三部曲•转化医学－B2B•ICHQ8－质量源于设计转化医学(translationalmedicine)：三部曲螺旋理论把基础研究的最新成果快速有效的转化为临床医学技术的过程。即从质量源于设计(Quality1.质量计划Quality实验室到临床，再从临

2、床到实验室byDesign，QbD)产品研Planning的连续过程(benchtobedside,发以预先设定的目标2.质量控制QualityB2B)，针对临床提出的问题，经深为起始，合理的方法Control入基础研究，并使研究成果得到快3.质量改进和质量风险管理，强Quality速应用后，又从临床应用中提出新Improvement朱兰问题反馈基础研究，并提供新的思调对产品和生产过程JosephH.Juran路。的认识。•产品质量过程是不断上升，不断提高的过程•从实验室到临床，再从临床到实验室的连续过程对产品质量的提高•质量源于设计和过程控制及质量风险管理举例说明、以小窥大、引起重

3、视报告内容•非限制性核酸内切酶处理细胞DNA后残余量检测的适用性•现行牛血清（蛋白/白蛋白）残留检测方法的使用讨论•疫苗生产用病毒种子的两种鉴别试验适用性讨论•疫苗成分诱IgE的过敏反应–Β-丙内酯作为疫苗灭活剂对人白蛋白的影响–冻干保护剂明胶•二倍体细胞用于不同扩增模式的生产工艺要点讨论•警惕氢氧化铝佐剂的不良反应非限制性核酸内切酶(Benzonase®Merck)处理细胞DNA后残余量检测的适用性•目前尚未有正式使用非限制性核酸内切酶处理的疫苗产品上市•利用非限制性核酸内切酶处理正在研发的疫苗产品–人用狂犬病疫苗（Vero细胞）–EV71灭活疫苗（Vero细胞）非限制性核酸内切酶

4、处理残余DNA商品化的非限制性核酸内切酶：非限制性核酸内切酶残留检测•采用大肠杆菌基因工程表达技术所得•酶的基本活性信息：•无病毒等外源因子污染•90%的DNA酶的活性单位1.0x106/mg•几无蛋白酶活性6•99%的DNA酶的活性单位1.1x10/mg•理论上可将DNA切割成3－8bp的小片段•按蛋白重量计：1U/1ng•使后续纯化工艺中容易去除小片段DNA•1u酶在相应条件下作用30分钟可降解核•残余“非限制性核酸内切酶”易用不同酸37µg。的层析法去除•使用酶标试剂盒检测：灵敏度为：0.2ng•0.2ng含0.2酶活性单位，可降解7.4µgDNA该试剂盒在最低检测限时（0.2

5、ng)，其酶活性残留到底还有多少仍不得而知，酶活性的残留风险是否需进一步评价。非限制性核酸内切酶处理残余DNA的建议•非限制性核酸内切酶处理制品中残余DNA不适为一种有效的方法，由于已切割成小片段，可排除DNA肿瘤基因和病毒核酸等污染风险因子。•使用非限制性核酸内切酶处理的制品是否应按不同细胞和不同制品特性验证其处理DNA的实际能力。•非限制性核酸内切酶残留量检测的验证建议在加入该酶后逐步取样进行细分步骤检测，验证各步骤的去除效果和酶活力降低趋势；•只在终产品中进行简单的按酶标方法并以酶蛋白含量的检测进行评价是否妥当，认为有待商榷。报告内容•非限制性核酸内切酶处理细胞DNA后残余量检

6、测的适用性•现行牛血清（蛋白/白蛋白）残留检测方法的使用讨论•疫苗生产用病毒种子的两种鉴别试验适用性讨论•疫苗成分诱IgE的过敏反应–Β-丙内酯作为疫苗灭活剂对人白蛋白的影响–冻干保护剂明胶•二倍体细胞用于不同扩增模式的生产工艺要点讨论•警惕氢氧化铝佐剂的不良反应牛血清（蛋白/白蛋白）残留检测方法的使用讨论疫苗等细胞培养生产的生物制品中牛血清蛋白残留可引起过敏反应牛血清中的蛋白成分复杂Ig抗体类蛋白牛血清---血清中的主要成分成分名称含量（g/L）分子量（万）2000年以前血清检测，1µl/ml白蛋白35-456.6α1抗胰蛋白酶1.4-2.85.5目前以白蛋白为标记物检测；α2巨球

7、蛋白0.7-2.880一旦Ig类特别是IgG的增加，将转铁蛋白2.1-4.557.7增加产品中残留风险；但无法α1脂蛋白2.8-5.62.8用现药典方法检出；β1脂蛋白2.8-1051IgA0.7-2.138.5Ig类抗体与培养物中细胞粘附IgM0.35-1.480结合，较难去除，是疫苗过敏｛IgG9.0-15.515反应的潜在风险；胆固醇1.50-2.80纤维结合蛋白0.001-0.01如存在与疫苗目标病毒对应的胆红素0.001-0.007抗体，将影响病