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时间:2020-03-31
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1、高中生物选修3答案与提示专题1基因工程1.1DNA重组技术的基本工具一、学习目标1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。二、学习重点和难点1.学习重点:DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。2.学习难点:基因工程载体需要具备的条件。三、答案与提示(一)思考与探究 2.联系你已有的知识,想一想,为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA?提示:迄今为止,基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的,它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基
2、序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA,是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制,对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中,含有某种限制酶的细胞,其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开。这样,尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断,并且可以防止外源DNA的入侵(本题不要求学生回答的完全,教师可参考教师用书中的提示,根据学生的具体情况,给予指导。上述原则也应适用于其他章节中有关问题的回答。)。
3、3.天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗?为什么?提示:基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒(plasmid),即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢?其实不然,作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。(1)载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点,以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置,还必须是在质粒本身需要的基因片段之外,这样才不至于因目的基因的插入而失活。(2)载体D
4、NA必需具备自我复制的能力,或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。(3)载体DNA必需带有标记基因,以便重组后进行重组子的筛选。(4)载体DNA必需是安全的,不会对受体细胞有害,或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。(5)载体DNA分子大小应适合,以便提取和在体外进行操作,太大就不便操作。实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件,都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。4.网上查询:DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗?40提示:迄今为止,所发现的DNA连接酶都不具有连接单
5、链DNA的能力,至于原因,现在还不清楚,也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。(二)寻根问底1.根据你所掌握的知识,你能分析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗?提示:原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵,但是,生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制,以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具,当外源DNA侵入时,会利用限制酶将外源DNA切割掉,以保证自身的安全。所以,限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效,从而达到保护自身的目的。2.DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?
6、为什么?答:不是一回事。基因工程中所用的连接酶有两种:一种是从大肠杆菌中分离得到的,称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到,称为T4连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同,都是连接双链DNA的缺口(nick),而不能连接单链DNA。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键(在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成),那么,二者的差别主要表现在什么地方呢?(1)DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在
7、两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。(2)DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外,二者虽然都是由蛋白质构成的酶,但组成和性质各不相同。(三)模拟制作讨论题1.你模拟插入的DNA片段能称得上一个基因吗?提示:不能。因为一般基因有上千个碱基对。2.如果你操作失误,碱基不能配对。可能是什么原因造成的?提示:可能是剪切位点或连接位点
8、选得不对(也可能是其他原因)。(四)旁栏思考题想一想,具备什么条件才能充当“分子运输车”?提示:能自我复制、有一个或多个切割位点、有标记基因位点及对受体细胞无害等。四、知识拓展1.限制酶所识别的序列有什么特点?限制酶所识别的序列,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线(图1-1),中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。图1-1限制酶识别序列的中心轴线2.限制酶在DNA的任何
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