白血病微小残留检测及其质量控制.pdf

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1、白血病微小残留的概念白血病微小残留检测MRD（MinimalResidualDisease)是指白血病患者经过诱导缓解治疗，并按目前所确定的疗及其质量控制效标准取得完全缓解（CR）后体内残留的微量白血病细胞上海市临床检验中心徐翀MRD是造成白血病复发的根源。上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratory白血病微小残留检测的意义白血病微小残留检测的意义早期预报白血病复发指导缓解后治疗化疗药物具有很强的毒性当患者MRD检测持续阳性或负荷逐渐增多，则可判断该患由于

2、个体差异，不同患者的白血病细胞对化疗药物的敏感性不同者可能出现复发。根据不同个体对药物的敏感性调整用药的方案个体化治疗MRD是反映白血病细胞对化疗药物作用的敏感性的最直接客观指标,MRD检测是个体化治疗的基础。上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratoryElaineCoustan-Smith,etal.Clinicalimportanceofminimalresidualdiseaseinchildhoodacutelymphoblasticleukemi

3、a.Blood.2000,RubnitzJ,etal.Minimalresidualdisease-directedtherapyforchildhoodacute96(8):2691-2696myeloidleukaemia:resultsoftheAML02multicentretrial.Lancet.2010,11:543-552上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratory1白血病微小残留检测的意义白血病微小残留检测方法的选择指导干细胞移植近20年

4、来的研究表明，当机体内白血病细胞数低于106时，MRD的检测将有助于判断合适的移植时机，提高移植成功则有可能依靠机体自身的免疫保护机制清除体内残留的白率，减少复发率。血病细胞。这意味着适合于急性白血病MRD检测的技术敏感度至少需要达到10-4，即在10000个正常细胞中可以检出1个白血病细胞。能达到10-4敏感度的方法只有流式细胞术和PCR方法上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratory聚合酶链反应（PCR）检测MRD融合基因1.融合基因优点：在整个病程中

5、，断裂点融合区十分稳定缺点：大部分白血病患者缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体异常，故方法具有局限性上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratory聚合酶链反应（PCR）检测MRDIG和TCR基因重排结合部序列IG和TCR基因重排结合部序列优点：在ALL中覆盖面广，可以对绝大多数ALL患者进行MRD监测缺点：由于白血病细胞中重组酶的活性较强，造成一些靶序列如IgH基因重排会发生进一步重排，从而造成假阴性上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCen

6、treforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratory2流式细胞术相对于PCR的优点流式细胞术检测白血病MRD原理1.快速、简便利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）2.流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据跨系表达的抗原产物的量进行推算。质的差异时相混乱的抗原与染色体异常相关的抗原差3.流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的异抗原表达量异常高细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞量的差异碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。抗原表达量

7、异常低上海市临床检验中心上海市临床检验中心ShanghaiCentreforClinicalLaboratoryShanghaiCentreforClinicalLaboratoryALLMRD检测的抗体组合ALLMRD检测的抗体组合St.JudeChildren’s（欧洲BIOMED-1合作组织）B-ALLResearchHospitalPLucio,GGaipa,EGvanLochem,etal.Leukemia.2001,15:1185-