不同类型恶性肿瘤患者t淋巴细胞表型分析

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1、3548可jE医药2013年12月第35卷第23期HebeiMedicalJournal，2013，Vol35DecNo．23doi：10．3969／j．issn．1002-7386．2013．23．011·论著·不同类型恶性肿瘤患者T淋巴细胞表型分析张文杰冯志山王智华【摘要】目的探讨不同部位恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞膜上CD3、CIM及CD；cD去(调节性T细胞，regulatoryT，Treg，)的分布情况。方法采用流式细胞术分析52例肿瘤患者外周血淋巴细胞中CD3、cD及CD：cD表达情况并与2O例健康对照进行比较

2、。结果不同组肿瘤患者的CD3细胞均低于健康对照组(P>0．05)；各组CD4均低于对照组，结直肠癌患者与对照组比较有统计学意义(P<0．05)；各组CD：cD夹表达均大于对照组，差异有统计学意义(P<0．05)。结论不同肿瘤患者CD3、CIM细胞表达均低于对照组，调节性T细胞在不同肿瘤患者外周血细胞中的表达均明显高于正常对照，肿瘤患者存在免疫功能异常。【关键词】恶性肿瘤；CD3；CD4；CD4+CD25；流式细胞术【中图分类号】R73【文献标识码】A【文章编号】1002—7386(2013)23—3548—02研究已证实

3、，机体免疫功能自衡与肿瘤的发生发展有着2Oo．1．CD4FITC20l，IGG1FITC．IGG2PE20l(所有试剂均应密切关系，机体抗肿瘤免疫机制复杂，其作用主要由细胞免疫在4~C冰箱保存，使用前取出，放至室温再进行细胞标记)，每功能介导，而肿瘤免疫逃逸是肿瘤发生发展的一个重要机制，管加入抗凝全血100l，涡旋震荡器充分混匀，室温(20—CD4cDTreg是Sakaguchi⋯等首先报道的一群具有免疫调节25℃)避光孵育15—20min，然后每管加入500l溶血素，避光功能的T细胞亚群，研究表明cDcDTreg比例增

4、高是肿瘤免孵育10min，加入500txl0．9％氯化钠溶液，避光放置10min，疫抑制导致多种实体肿瘤进展和化疗耐受的原因之一，本1500r／rain离心5rain，弃上清，加入1ml缓冲液重悬细胞，用研究采用流式细胞术检测不同肿瘤患者外周血淋巴细胞膜上于上流式细胞仪计数分析，所有样本均在采集后2h内标记，T细胞各表型的比例变化，探讨不同肿瘤患者与T淋巴细胞表24h内上机分析，标本流式细胞上机时，以同型对照设定电压，型的关系。所有实验均在相同条件下进行，获取10000个细胞；表型分析l材料与方法以淋巴细胞设门进行，流式

5、分析图样图见图1。1．1标本来源收集2011年12月至2012年6月我院收治的河向角、侧向角圈肿瘤患者52例，均为初诊患者，并经病理诊断证实，未进行放化疗及免疫治疗，其中肺癌患者34例，男19例，女15例；平均謦鳓年龄(65±7)岁；胃癌患者9例，男5例，女4例；平均年龄(67±6)岁；结直肠癌患者9例，男4例，女5例；平均年龄(70±8)

6、00岁；健康对照(均为体检者，无肿瘤病史及家族史)20例，男11例，女9例；平均年龄(63±8)岁。FSIIN①C1)3PC5⑦1．2仪器设备试剂流式细胞仪为BECKMANCOULT

7、ER公司{cD的EpicsXL型；移液器为DRAGEN5—2O和20～100txl，1000l可调式加样器；离心机为白洋离心机厂生产的医用低速离心机；混旋器为XK96一A快速混匀器，由姜堰市新康医疗器械有限公司提供；冰箱为日本东芝。流式试剂分别为CD3PECY5，CD4FITC，CD8PE，CD25PE标记，溶血素为OPTIL—YSE—C，它们均为BECKMANCOULTER公司生产。1．3流式细胞术分析空腹采集健康体检者与肿瘤患者外周CD4FITCFI11OC,③血液5ml，EDTA—K2抗凝，对每例外周血白细胞进行计

8、数，确保图1检测样本流式分析图样图(①为设门图；②为CD3、CD4图；白细胞计数范围在(4．0—10)×10个／L，对于不能满足此条③为CD4+cD图；④为阴性对照)件的标本用生理盐水进行稀释或加大标本与抗体用量，取三支1．4统计学分析应用SPSS11．5统计软件，计量资料以±S试管分别加入CD3CY5一CD4FITC—CD8PE抗体20l及CD25PE表示，多组间比较采用单因素方差分析，2组问比较采用t检验，P<0．05为差异有统计学意义。作者单位：050051石家庄市，河北省人民医院老年医学重点实验2结果室(张文杰、

9、王智华)；河北省儿童医院(冯志山)不同肿瘤患者的CD3均低于健康对照组，但差异无统计学阿北医药2013年12月第35卷第23期HebeiMedicalJournal，2013，Vol3DecNo．233549意义(P>0．05)；4组CD4均低于对照组，结直肠癌患者与对瘤患者不仅CD4*cD矗细胞升高，其还与患者的生