不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响

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1、2013，47(12)：25～27／王彬，等中国兽药杂志不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响王彬，孙德君，柴华(哈药集团生物疫苗有限公司研发中心，哈尔滨150069)[收稿日期]2013～06—14[文献标识码]A[文章编号]1002—1280(2013)12—0025—03[中图分类号]$852．43[摘要]为研究提高卵黄液除脂率和卵黄抗体的纯度，建立适合大量生产卵黄抗体的工艺，比较了不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响。最终确定卵黄液与醋酸盐体积比为1：8、pH值调至5．2、2～8℃沉淀15h(过

2、夜)时，除脂的效果最理想，且蛋白的纯度高，适合大量提取卵黄抗体。[关键词]卵黄抗体；除脂率；pH值Effect0ftheDiflferentConditionsontheFatRemovalRateforYolkSolutionandthePurityofIgYWANGBin，SUNDe—jHn，CHAIHua(HarbinPharnm~euticalGroupCoLtdBiologicalVaccine，Harbin150069，China)Abstract：Theaimofthisstudywastoincrease

3、thefatremovalrateforyolksolutionandthepurityofIgY，andestablishamanufactureprocessforIgYproduction．TheeffectofthefatremovalrateforYolksolutionandthepurityofIgYunderthedifferentconditionsshowedthathighfatremovalrateyolksolutionandpurityofIgYcouldbegotifwedilutethey

4、olksolutionwithacetatebufferninemultiple，andadjustpHvalueto5．2，andputtheprecipitationat2—8℃for15hours．Keywords：IgY；rateofthefatremoved；pHvalue卵黄抗体(immunoglobulinofyolk；IgY)是禽类糖、硫酸铵等J。这些除脂方法工艺流程长，步骤经特定抗原免疫后，在卵黄中所产生的相应特异性多，试剂消耗量大，而且多数情况下还须将残留的抗体¨J。IgY是一种天然存在、无残留、无毒

5、副作化学物质除去，给大量生产带来一定困难。本实用的免疫球蛋白，是抗生素的替代品J。目前高免验参考相关发表文献J，对试验方法进行探索和改卵黄液广泛应用于一些疾病的紧急预防和治疗，而进，旨在对不同比例溶解卵黄、酸度、存放条件下除大多使用的是粗制高免卵黄液-4j。由于高免卵去脂肪和杂蛋白的效果进行对比，以确定适合生产黄自身存在的一些缺陷，如卵黄中含有大量杂蛋白的提取方法。及脂肪等物质，造成注射困难、难以吸收、局部肿1材料与方法胀、过敏反应、保存和运输不便等，故限制了其在疾1．1材料病防治上的应用J。除掉卵黄中脂类的方法很多，1

6、．1．1试剂醋酸钠、冰乙酸、正辛酸、硫酸铵均常用脂质凝集剂，如酪蛋白、卡拉胶、海藻酸钠等，为国产分析纯，蛋白质Marker、buffer均购自宝生物也有化学物质提取，如聚乙二醇、乙醇、硫酸葡聚工程(大连)有限公司。作者简介：王彬，硕士，从事动物疫苗研制工作。E—mail：hashidewb@gmail．com2013，47(12)：25～27／王彬，等中国兽药杂志IgY的纯度。从电泳图中可以看出，当pH值为4．8和5．0时所提取的IgY在约35～45kD处有一条蛋白带，而pH值为5．2和5．5时则没有，说明如果上清液中存

7、在大量脂肪，则影响正辛酸的去除非Ig类蛋白的效果，因此优化除脂率高的条件的试验条件对所提取的IgY纯度起到决定的作用。2～8℃感作5h和15h对试验结果没有太大影响，但感作5h沉淀较为松散，需离心才能收到¨大量的上清；而感作15h则不需离心，就可以收集到大量上清液，而且与离心所收集的上清相差不Ⅲ1为沉淀5h卵黄液提取IgY；2为沉淀15h卵黄液提取IgY；多，因此就大量生产而言，沉淀15h将降低生产成3为标准蛋白质Marker本。图2不同温浴时间提取IgY纯度比较目前有多种卵黄抗体提取方法，且均适合实验室提取制备卵黄抗体

8、，但本方法所提取的卵黄2．5IgY的效价试验不同除脂条件对所提取的抗体纯度较高，不仅适合实验室研究使用，同时适IgY的琼扩效价没有影响，抗体效价均达到1：128。合大规模车间生产。3讨论鸡卵黄中水48％、蛋白质17．6％和脂肪30％，参考文献：其中几乎所有脂肪与蛋白质结合形成脂蛋白-．。。。[1]孙智锋．母鸡一一未来