遗传学实验指导.pdf

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1、遗传学实验指导生物实验教学中心主编：张巧仙2009-06-01目录（一）细胞遗传学综合实验模块5实验一、植物有丝分裂标本制备与染色体核型分析5实验二、蚕豆减数分裂花粉母细胞制片及观察13实验三、蝗虫精母细胞减数分裂制片及观察17实验四、姊妹染色单体分染技术20实验五、染色体分带技术25实验六、蚕豆根尖微核检测技术27实验七、小鼠骨髓细胞染色体标本制作32实验八、植物多倍体人工诱导35实验九、果蝇唾腺染色体标本的制备与观察38实验十、巴氏小体的观察与染色体疾病42（二）经典有性杂交综合实验模块45实验十一、粗糙链孢霉的杂交45实验十二、果蝇的性状、生活史观察及饲

2、养50实验十三、果蝇的单双因子、伴性遗传及三点试验56实验十四、高等植物有性杂交63（三）微生物遗传综合实验模块65实验十五、细菌转导（局限性转导）65实验十六、大肠杆菌的重组子遗传分析71实验十七、大肠杆菌诱变处理与营养缺陷型筛选77（四）群体遗传综合实验模块84实验十八、人群中ＰＴＣ味盲基因频率的分析84实验十九、人类群体一些遗传性状的调查和分析86（五）分子遗传综合实验模块87实验二十、植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定87实验二十一、碱裂解法抽提质粒DNA90实验二十二、植物基因组DNA的酶切及目的片段的回收932实验二十三、DNA的体外连接97

3、实验二十四、大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化102实验二十五、重组克隆的快速鉴定107实验二十六、小鼠SRY等基因的PCR扩增1093（一）细胞遗传学综合实验模块实验一、植物有丝分裂标本制备与染色体核型分析（6学时）（综合实验）掌握植物根尖染色体制片技术，观察分析植物细胞有丝分裂各时期细胞及染色体形态、中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征，学习染色体核型分析的方法。第一部分植物染色体压片法一实验目的1.学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。2.观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。二实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖

4、、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，其中根尖是最常用的材料：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。预处理主要

5、通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时，预处理还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。常用的预处理有物理法、化学法、混合处理法等。植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部4分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色体。常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。酸解法：步骤简便、容易掌握。根尖分生组织经过酸解和压片后，呈单细胞。酸解法广泛用于染色体计数、核型分析和染

6、色体畸变的观察及相关分析。酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直接作用于染色体。在普通光学显微镜下观察染色体形态结构还需要对材料进行染色，通常采用染色体染色效果好而细胞质着色少的碱性染料、酸性染料或孚尔根试剂染色。三实验材料蚕豆(Viciafaba,2n=2x=12)根尖四实验器具、试剂显微镜、恒温箱、水浴锅、计时器、培养皿、酒精灯、小烧杯、试管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、刀片、解剖针、吸水纸、纱布、标签纸、铅笔、橡皮等常用工具。0.

7、1％秋水仙碱，或饱和对二氯苯溶液，卡诺氏固定液，改良石炭酸品红染液，冰乙酸，甲醇，无水乙醇，95％乙醇，0.1％升汞，１mol/L盐酸。五实验方法1．发根将蚕豆种子用0.1％升汞消毒10min，经流水冲洗，温水浸泡1～2d后，置25℃恒温箱中发根。待主根长到2cm左右时剪去主根（须根系植物的种子发出的主根不需剪掉），让其充分长出侧根。待侧根长到1～2cm时，于适宜时间用蒸馏水洗净，将水吸干，剪取根尖0.5～1cm进行预处理。为获得尽可能多的分裂相，蚕豆根尖以上午9～10时剪取为宜。2．预处理将剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙碱或饱和对二氯苯水溶液中，以药液浸没

8、根尖为度，处理3～4h。抑制和破坏纺锤