动物细胞培养和核移植技术-(2).ppt

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1、动物细胞工程其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？思考？取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植。（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖一、动物细胞培养(三)、动物细胞培养过程取动物组织块剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物

2、细胞工程技术的基础剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的？剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的：将组织分散成单个细胞，有利于细胞与培养液充分接触，便于培养。制成细胞悬液动物胚胎或幼龄动物器官因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。（四）动物细胞生长特性1.细胞贴壁：细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑无毒、易于贴附。2.接触抑制接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。50代以后失去接触抑制接触抑制（细胞为单层）50代以后细胞失去接触抑制原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养

3、称为原代培养。传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。培养过程：动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官细胞悬浮液→原代培养传代培养10代细胞50代细胞无限传代单个细胞胰蛋白酶加培养液剪碎细胞贴壁剥离分瓶部分细胞的细胞核型发生变化动物细胞培养最终不能培养成动物体接触抑制培养器皿超净工作台实验设备细胞培养箱倒置显微镜（五）、动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境（①添加一定量的抗生素；②定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等）3、温度和PH温度36.5+0.5度，pH

4、7.2～7.44、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）（使用合成培养基时，需加入血清、血浆等）补充合成培养基中缺乏的物质，如血清激素、氨基酸等。CO2有调节PH的作用。思考与讨论1、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？主要是蛋白质。不行，因为动物细胞培养适宜PH为7.2—7.4，而胃蛋白酶适宜PH为2.0，胃蛋白酶会失去活性。长时间会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。所以应控制好胰蛋白酶的消化时间。P443、动物细胞培养液与植物组织培养基相比，有何独特之处？4、动

5、物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？动物细胞培养液的独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖动物血清培养结果植物体细胞数目增多培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白动物细胞培养技术的应用生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。用于检测有毒物质用于生理、病理、药理等方

6、面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据P50动物细胞培养要经过脱分化过程吗？为什么？不经过。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。核移植受体细胞：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。2.原理：动物体细胞核的全能性。（难度高）MⅡ期的卵母细胞选用去核卵母细胞的原因：①卵母细胞比较大，容易操作；②细胞质多，营养丰富，含有促

7、进细胞核全能性表达的物质。②胚胎移植①动物细胞核移植原理：动物细胞核具有全能性和细胞膜的流动性讨论：1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使遗传物质全部来自有重要利用价值的动物。P492.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为