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1、一52一江苏农业科学2013年第41卷第11期徐式近,徐忠传.不同菊花品种高效直接再生体系的构建[J].江苏农业科学,2013,41(11):52—54,100不同菊花品种高效直接再生体系的构建徐式近,徐忠传(1.苏州大学金螳螂建筑与城市环境学院,江苏苏州215123;2.常熟理工学院生物与食品工程学院,江苏常熟215500)摘要:以9个菊花品种叶片、茎段为外植体,用6种分化培养基与3种生根培养基直接再生不定芽,研究激素组合及外植体对不同菊花品种直接再生的影响。结果表明,9个品种的茎段与6个品种的叶片都有较高的再生能力,但品种“28”“5—17”的叶片未分化出不定芽,品种“11”的叶片
2、再生率也不高;多数菊花品种茎段的再生能力高于叶片;再生率为84%~100%,繁殖系数为2.3~9.4,可应用于工厂化快繁与基因工程育种。关键词:菊花;叶片;茎段;直接再生中图分类号:$682.11文献标志码:A文章编号:1002—1302(2013)11—0052—03菊花(Dendranthemamorifolium)为菊科菊属多年生宿根1.3方法草本植物,是我国十大传统名花之一,也是世界四大切花之1.3.1组培苗扩繁为了扩繁保存组培苗,将9个菊花品种一,其花色丰富、花形优美、品种多样,具有较高的观赏、药用的组培苗剪成带1个节的茎段与茎尖,接种到培养基(4)中,价值。菊花再生体系研究
3、起源于20世纪60年代,目前已每瓶接种6~8个茎段或茎尖,3周左右分化出不定芽,之后经建立了以叶片、叶柄、茎尖”、茎段、花不定芽增多长大,6周后分离不定芽,接种到MS培养基中,使器官’等为外植体的菊花再生体系。菊花再生体系研究其生长生根,长到5CII'I左右后再重复上述操作,如此重复,直中,常以MS培养基为基本培养基,6一BA与NAA为生长调至获得充足的材料。节剂,“。菊花再生受基因型限制,再生体系没有1.3.2不定芽诱导选择生长健壮、整齐一致的组培苗,剪普遍性’。。”。愈伤组织再生不定芽容易产生遗传变取顶部4—6张叶面积大于0.5cm的幼嫩叶片’,沿着异与嵌合体,直接再生不定芽能保持
4、遗传性状、简化程序、缩垂直于主脉方向剪2个刀口,正面朝上,水平放入分化培养短繁殖周期。本试验以9个菊花品种的叶片、茎段为外基,每瓶接种6~7张叶片。剪取长约0.5cm左右带1个植体,以6一BA、NAA为生长调节剂直接诱导不定芽,旨在建节的茎段,剪掉叶片,留少许叶柄以免损伤叶腋,形态学上端立高效、简单、稳定的菊花直接再生体系。朝上,垂直插入分化培养基,每瓶接种4—5个茎段。每个处理至少10个外植体,重复3次。42d后统计长度为0.5cm1材料与方法以上不定芽个数(不包括玻璃化芽),再生率与繁殖系数计算1.1材料公式如下:再生率=分化出不定芽的外植体数/接种的外植体以9个菊花切花品种的组培
5、苗为试材(张家港骏马科技数×100%;繁殖系数:分化出的不定芽数/分化出不定芽的有限公司),用编号替代品种名:⋯3⋯3—2”“28”“5—17”外植体数。“17”“2”⋯9“⋯6“11”。外植体为叶片与茎段。1.3.3生根以“3”“3—2”“5—17”3个品种为例,当不定1.2培养条件芽长至3cm左右时,剪下生长健壮、整齐一致的不定芽接种除生根试验以1/2MS。”作为基本培养以外,其他试验到生根培养基,每瓶接种4—5个不定芽。每个处理取8—10均以MS作为基本培养基,添加3Og/L蔗糖与8g/L琼脂,pH个外植体,重复2次。14d后统计生根率、生根数、根长。值为5.8~6.0,其中分化
6、培养基分别附加:(1)6一BA2结果与分析0.5mg/L+NAA0.1mg/L;(2)6一BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;(3)6一BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;2.1激素组合对菊花茎段直接再生的影响(4)6一BA2.0mg/L+NAA0.2ⅡlL;(5)6一BA2.0mg/L+将9个菊花品种的茎段接种于6种分化培养基中,1周NAA0.5mg/L;(6)6一BA3.0me/L+NAA0.5mg/L。后茎段基部膨大,叶腋处发出1个腋芽,2周后分化出不定生根培养基分别附加:(7)NAA0mL;(8)NAA芽,少数不能分化出不定芽或不定芽玻璃化(芽体透明、扭0.05mg
7、/L;(9)NAA0.1mg/L-61;(10)NAA曲、易碎),3周后不定芽迅速增多,形成丛生芽。由表1、表20.2HL;(11)NAA0.4me/L,。培养温度(25±2)℃,日可知,在6种分化培养基上,9个品种均能形成不定芽。激素光灯光源,光照度21—24Ixmolf(m2·s),光照时间为12h/d。组合对菊花茎段的再生率影响不大。综合考虑芽的生长情况与成本,9个菊花品种茎段的最适分化培养基分别为:⋯3’“5—17”为培养基(2),“3
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