烟叶常规测定方法.doc

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1、3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖一、仪器与用具25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。二、试剂1.1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。2.3,5－二硝基水杨酸(DNS)（显色液）：6.3g3,5－二硝基水杨酸和262ml2mol/LNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加

2、蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。三、实验步骤：1．可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。2．标准曲线的绘制：取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min

3、，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。3．还原糖的测定：取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。4．计算：还原糖（％）=〔（C×V/a）/(W×1000)〕×100C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数；V－提取液的体积（ml）；W—样品重量（g）;a=0.01注意：1.在称取烟叶前离心管内先加入4ml80%乙醇，加入烟叶后立即充分摇匀，以防烟叶凝结

4、成块，影响还原糖测定。2.称取完烟叶后，在浸提之前先混匀后静置10min。3.在第一次浸提过程中应充分摇匀3-4次，第二次和第三次充分摇匀2次，摇匀之前先将盖子打开，释放管内热蒸汽，以防管内液体喷出。4.吸取提取液之前应再次摇匀提取液，比色之前也应将待测液充分摇匀后才能进行比色，因为还原糖沉降速度极快，不充分摇匀将严重影响实验数据的准确性。5.水浴锅内水位必须达到离心管内液面之上6.比色之前应先检查比色杯空杯（内乘双蒸水）的吸光度是否一致。最好选用差别在0.003之内的比色杯。烟叶中烟碱的测定（提取脱色法）（一）方法原理由于烟碱和无机酸结合较有机酸强，

5、因此，用一定浓度的无机酸提取，完全可以把烟碱从烟叶中分离出来。同时，用粉状活性炭脱去提取液中杂色。然后根据烟碱对紫外光有选择吸收，其吸光度与烟碱含量呈正相关，可由紫外分光光度计测得待测液的浓度，计算出烟碱的含量。（二）试剂及仪器40g/kgHCl：吸取4mLHCl倒人80mL水中，定容至100ml分析天平、紫外分光光度计、恒温水浴锅。（三）操作步骤1．待测液的制备称取粉碎均匀通过60目筛的烟样30mg左右，置于100mL三角瓶中，加入1/3角勺粉状活性炭和40g/kgHCl25mL，不断振荡10min，然后过滤到100mL容量瓶中，并少量多次用蒸馏水冲

6、洗三角瓶，将洗液滤入容量瓶中，并定容至刻度，充分摇匀，以备测定用。另把40g/kgHCl25mL加入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀做空白。2．测定将上述待测液置紫外分光光度计上，以空白作参比，调吸光度为零，在236nm、259nm、282nm处测定待测液的吸光度。（四）结果计算1.059×[A259－1/2（A236+A282）]烟碱%＝————————————×100W（1-水%）×34.3×1000式中W——干样重(g)；1.059——换算为重量法测定值的校正系数；34.3——烟碱的吸光系数。(五)注意事项（1）不要用颗粒状活性炭。（2）

7、及时清洗用具，否则活性炭很难洗干净烟叶中氯含量的测定（浸提法）——热蒸馏水法一、实验原理依据烟叶中的氯大都以离子状态存在的特点,用热水将氯从烟叶中提取出来,可节省时间、提高效率,但提取液中有影响滴定终点的黄色素。根据碱性醋酸铅常用作液体澄清剂的特点,在用热蒸馏水浸提烟叶中氯的同时,加入碱性醋酸铅,有效去除浸提液中干扰测定的色素,得到一个快速制备氯待测液前处理的简便方法(浸提法)。在含有C1-的溶液中，以K2CrO4作指示剂，用AgNO3标淮溶液瘸定，由于AgCl的溶解度比Ag2CrO4小，反过来说，铬酸银的溶液度比AgCl的高，开始时只生成AgCl沉淀

8、，待CI-作为AgCl全部沉淀完毕后，过量一滴AgNO3才生成Ag2CrO4砖红色沉淀。NaC