生物化学实验口试题目及要点参考.docx

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1、1、物质分离纯化的总体思路是什么？在进行生物大分子的分离纯化时应该注意什么？答：1）物质分离纯化的总体思路是：首先我们要建立一种灵敏的检测手段来检测待分离物质，之后根据待分离物质与其所处体系中其他物质的特性及差异来探求分离纯化的方法，力求所用步骤最少、每一步的纯化率最高、回收率最好，最后对提纯的物质进行检测以确定该物质是否达到提纯要求。2）生物大分子都具有一定的空间结构，而维持空间结构的正是那些次级键（非共价键），这些次级键非常不稳定，容易遭到破坏，在对生物大分子进行分离纯化操作时保证这些键不被破坏，即保证其活性。因此，操作时需要在合适的条件下进行操作（低温、使用缓

2、冲液），另外要加入抗氧化还原的物质或者蛋白酶抑制剂避免其发生氧化还原反应及被酶分解，总之，不能够破坏其结构与活性。2、为什么对生物体系的同一类甚至同一物质会有不同的含量测定方法？在实际工作中如何选择？答：生物体系是复杂的，也是未知的。我们根据生物体系中待测物质的物理或化学特性来建立含量的测定方法，如可针对待测物质的某一化学基团来进行含量检测，而在整个生物体系中，也有许多的其他物质具有这一性质，它们具有共性，如此一来，这样的非待测物质就会成为含量测定的干扰因素，影响结果的可靠度。人们开始寻找更为可信的方法，去寻找针对其他理化性质建立测定方法，从而产生了多种含量测定方法

3、。但是生物大分子之间的共性非常多，所以方法总是有或多或少的干扰因素（可举例说明）。在实际工作中，我们应该选择干扰因素小的方法。根据自己的工作需要，如精度要求、可重复性等，来选择合适的方法。3、酶活力测定的总体思路是什么？为什么该类测定中都有所谓对照管的设计？对照管的设计要注意什么？答：1）酶活测定的总体思路是在最适条件下，测定酶促反应初速度。2）由于测定酶活时，目标酶常常处于一个生物体系内，该体系较为复杂，为了确保我们所测的酶活为目标酶的酶活，需要设计对照管来消除干扰及影响。设计对照管排除非酶促反应阶段酶促反应的影响。在设计对照管时，要注意除其不发生目标酶的酶促反应

4、外，其他外界条件均要与测定管一致，如底物含量，反应条件等。44、在生物化学研究中，为什麽一般均要使用缓冲液？在使用缓冲液时应注意哪些问题？答：1）生物化学研究的对象生物大分子多为两性物质，如蛋白质、核酸等，拿蛋白质来说，其结构单元是氨基酸，氨基酸是两性的，它的某些基团的解离状态是受到pH影响的，“结构决定性质，性质决定功能”，这就导致蛋白质的性质和功能受到影响。对于研究工作来说，多数需要测定生物大分子在特定活性下的特性，因此需要固定pH。当然，缓冲液就具有维持和稳定特定pH的特定，所以常选用缓冲液。2）在使用缓冲液时，一要注意根据目标物特性选择合适的缓冲范围；二要考

5、虑缓冲液组分和待测组分不能发生相互作用或者化学反应。比如：缓冲液组分有可能是酶的激活剂或者抑制剂。再如，常用的磷酸缓冲液，在进行与ATP相关的实验时就不能使用，因为ATP水解产生磷酸根，会对缓冲液组分有所影响。5、众多测定淀粉酶活力的实验设计中一般均采取钝化b-淀粉酶的活力而测a-淀粉酶和测总酶活力的策略，极少看到采取钝化a-淀粉酶活力去测b-淀粉酶的活力，为什么？这种设计思路说明什麽？答：1）采取钝化b-淀粉酶的活力而测a-淀粉酶活力，在70℃时钝化b-淀粉酶，使其完全失去活性，此后采取骤冷处理方式，升温至40℃时，又不会恢复其活性。而钝化a-淀粉酶，在pH3.7

6、条件下钝化，使a-淀粉酶变性，等到恢复待测定酶活最适pH时，a-淀粉酶则有可能会复性。此外，调节pH时一般需要使用缓冲液，那么就要考虑到缓冲液中的组分（如某些离子）有可能是所测酶的激活剂或者抑制剂，这样一来所测酶的活性就不准确了。相比较而言，温度变量是容易控制的，而且高温对a-淀粉酶活性基本无影响，却对b-淀粉酶有较好的钝化作用，并且在测定过程中我们没有引入其他的影响因子。2）说明在实验设计中，要注意考虑方法的可行性、科学性以及相关因素的干扰。6、紫外法测定RNA含量时，为什么要固定测定液的pH值，若pH值不固定，会影响测定结果吗？为什么？答：在测定RNA含量之前需

7、用2%氨水调pH7.0。这样做的原因有以下几个：（1）核酸在过酸或者过碱条件下，双螺旋区会发生氢键断裂，紫外吸收升高，这种现象称为增色效应。此外在不同pH溶液中，4嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收也随之表现出明显的差异。而紫外法通过测定OD260值来计算RNA含量，因此需要排出相关变量对紫外吸收的影响。（2）核酸的摩尔消光系数（比消光系数）ε（ρ）并不是一个确定的值，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH和离子强度发生变化，其经典数值均是在pH=7.0条件下测得的，故使用比消光系数法测RNA含量时需要调节pH7.0。（3）生理pH7.0条件下有利于核酸的溶