小鼠在免疫抗原后机体产生的特异性免疫应答研究.doc

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1、实验目的：验证小鼠在接受抗原之后机体产生了特异性免疫反应，并观察小鼠各项生理指标以及免疫器官的反应状况，再观察T细胞和B细胞在此应答的反应状况。实验假设：小鼠免疫灭活疫苗之后，机体会逐渐产生特异性免疫应答，一方面T细胞在接受抗原刺激之后，经过阳性和阴性选择，T细胞从CD4，CD8双阳性选择为单阳性T细胞，并逐步转移，最终到达淋巴结等组织产生效应；另一方面，B细胞也会发育分化为浆细胞和记忆细胞，相应的浆细胞产生抗体以应对抗原。由于小鼠在接受抗原之后，免疫细胞在胸腺和脾脏内的数量和种类将发生变化，另外小鼠血清中也会产生相应的抗体。因此假设，在排出其他偶然因素引

2、起的误差的情况下，有以下结果：1.免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。2.免疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。3.免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。4.免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。预期结果：预计结果与假设一致，即：1.免疫后的小鼠胸腺大小比对照组更小，脾脏大小比对照组更大；另外免疫后小鼠的淋巴结比对照组更大。2.免

3、疫后的小鼠胸腺免疫细胞数量小于对照组，脾脏免疫细胞数量大于对照组。3.免疫后小鼠胸腺中的单阳性淋巴细胞比对照组单阳性淋巴细胞更多，双阳性淋巴细胞比对照组更少；免疫后小鼠的脾脏中单阳性淋巴细胞数量多于对照组单阳性淋巴细胞数量。4.免疫后小鼠血清里面的抗体检测呈阳性，对照组小鼠血清抗体检测呈阴性。实验方法：一、小鼠免疫后与对照组的中枢和外周免疫器官的观察实验原理：实验采取DH5α灭活菌液为抗原，对小鼠进行注射，小鼠在接受抗原之后，机体会对其产生免疫应答，然而抗原在体内具有一定的半衰期，重复注射可以提高机体的免疫应答强度。当小鼠产生特异性免疫应答之后，机体的中枢

4、和外周免疫器官大小会发生变化，即表明小鼠产生的免疫应答程度。实验材料：1.BALB/c小鼠：6-10周龄，雄鼠，清洁级，上海斯莱克实验动物有限公司2.DH5α灭活菌液（2×109个/ml）：制备方法：将DH5α扩增至饱和，取出3500rpm离心15min，弃上清，用生理盐水重悬计数，121℃，20min灭活，计数并稀释。（3次接种，每次500ul）3.工具：1ml注射器（针头），酒精棉球，眼科剪，眼科镊，眼科弯镊，废物筒，解剖板，离心管（离心管架），小鼠尸体袋。4.试剂：生理盐水（3次接种，每次500ul）实验方法：①第一次抗原免疫小鼠1.做好准备工作，注

5、射器内装入1mlDH5α灭活菌液和生理盐水2.腹腔注射：小心抓起小鼠，使小鼠腹部朝上，用酒精棉球擦一擦，向小鼠的中线略左的位置，先挑其表皮，再斜向下插入0.5-1cm的距离，注射后拔出，用剪刀剪去耳朵做好标记。3.鼠笼做好标记，等待一周后，再第二次免疫小鼠。②第二次免疫小鼠大约一周后，根据做好的标记，用相同的方法进行免疫，再放回鼠笼，等待一周。③第三次免疫小鼠大约一周后，根据做好的标记，用相同的方法进行免疫，再放回鼠笼，等待一周。④取小鼠血清，脾脏，胸腺及腹股沟淋巴结a.小鼠的眼部取血1.离心管，离心管架准备，套上保鲜膜，并做好标记。2.对应标记的取血：小

6、心抓起小鼠，暴露其眼球，小心剪去眼球以及相应血管，并轻轻抚摸小鼠胸部，尽量收集血液。3.等小鼠不再流血后，脱臼法处死小鼠，血液静置一小时，并编号。b.脾脏，胸腺及腹股沟淋巴结的摘取1.取处死的小鼠，腹部朝上，使腹腔伸展，并固定四肢。2.解剖剪去上皮，小心将上皮撕开，在腹股沟约三叉血管交叉处寻找类似球形实心组织，即为淋巴结。3.小心剪开腹部，在小鼠右侧肠道位置找到脾脏并取出。4.小心剪开胸骨，在心脏上部找到两瓣白色的器官，即为胸腺。c.血清分离1.静置的血清，离心5min，3000rpm2.小心取上清液，编号，若为淡黄色，即可收集保存，否则重复第一步。3.冷

7、藏血清，为后续实验做准备。数据获取及处理：获得免疫组和对照组的免疫器官之后，将其置于一张纸上对比拍照，并通过照片观察可得到相应结论。二、小鼠免疫后淋巴器官中淋巴细胞绝对数的变化实验原理：利用200目钢丝筛网，研磨胸腺和脾脏并过滤掉结缔组织，即可获得淋巴细胞和红细胞的混合物，通过红细胞裂解液的作用使红细胞裂解，即可获得纯的淋巴细胞，通过血细胞计数板的计数，即可反应各个淋巴器官的淋巴细胞的数量变化。实验材料：1.BALB/c小鼠：6-10周龄，雄鼠，清洁级，上海斯莱克实验动物有限公司2.DH5α灭活菌液（2×109个/ml）：制备方法：将DH5α扩增至饱和，取

8、出3500rpm离心15min，弃上清，用生理盐水重悬计数，121