pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及其意义.doc

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1、Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及其意义［摘要］目的检测膀胱尿路上皮癌组织中Pokemon蛋白的表达，分析其与临床病理特征间的关系。方法收集2010年3月〜2013年8月宁波大学附属医院泌尿外科27例膀胱尿路上皮癌术屮切除的癌、癌旁及临近止常组织，应用免疫印迹法(Westernblot)检测标本中Pokemon蛋白的表达，并对其与膀胱癌的临床病理特征进行分析。结果Westernblot检测到Pokemon蛋口在膀胱尿路上皮癌组织中表达较高、在癌旁及正常组织中表达较低，差异有统计学意义(卩〈0.05)o膀胱癌组织中卩okemon蛋白表达与肿瘤病理分级有关，而与患者的性别、年龄、

2、吸烟史及T7M临床分期无明显相关。结论Pokemon蛋白表达和膀胱尿路上皮癌的发病及恶性程度有关，可能成为膀胱尿路上皮癌治疗的有效靶点。［关键词］卩okemon蛋白；膀胱尿路上皮癌；免疫印迹［中图分类号］R737.11［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2014)07(a)-0056-03原癌基因Pokemon是转录抑制因子P0K家族的成员，它的主要作用是阻遏关键的抑癌基因ARF,使致癌基因发挥作用。现有研究证实Pokemon在淋巴瘤、肝癌、肺癌等不同组织器官的恶性肿瘤中异常表达，但在膀胱癌屮的表达状态尚未明确。本研究通过检测Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达情况，

3、探讨Pokemon与膀胱尿路上皮癌发病机制及临床病理特征之间的关系。1资料与方法1.1一般资料收集宁波大学附属医院泌尿外科2010年3月〜2013年8月行膀胱肿瘤手术，且经术后HE染色病理诊断明确为膀胱尿路上皮癌，排除外伴发其他脏器原发恶性肿瘤，共27例，取术中切除的癌、癌旁及临近正常组织。27例患者中男22例，女5例；年龄41-81岁，中位年龄67岁；有吸烟史19例，无吸烟史8例；T1+T2期15例，T3+T4期12例；区域淋巴结转移6例，未发现淋巴结转移21例；高分级癌23例，低分级癌4例。1.2主要试剂与仪器RIPA裂解液（碧云天公司），PVDF膜（0.45Mm,Pall公司），

4、BCA蛋白定量试剂盒（Thermo公司），Pokemon抗体（兔多克隆，Abeam公司）,B-actin抗体（鼠单克隆,sigma公司），HRP标记驴抗鼠（Jackson公司）,HRP标记羊抗兔（妙通生物科技有限公司），ECL发光试剂盒（天根生化科技有限公司）。蛋白定量酶标仪（Riotek公司），蛋白转移电泳仪DYY-7B型（北京市六一仪器厂）。1.3Westernblot检测参考文献［1］的方法，切取-80°C低温保存的组织，提取蛋白并定量后在5%浓缩胶和8%分离胶屮行电泳、转膜，封闭后按步骤结合一抗、二抗。洗膜后显影曝光。用软件QuantityOne分析条带灰度值，计算卩okemo

5、n蛋白表达的强度。1.4统计学方法采用统计软件SPSS11.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数土标准差(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用x2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1Pokemon蛋白在膀胱癌、癌旁及正常组织中的表达差异Westernblot结果如图1所示，QuantityOne软件分析并求得灰度比后，结果显示：Pokemon蛋白在膀胱癌组织、癌旁组织和正常组织中表达分别为(0.715土0.135)、(0.449±0.157)、(0.418±0.163),差异有统计学意义(P0.05)o2.2Pok

6、emon蛋白与膀胱尿路上皮癌各临床及病理特征间的关系Pokemon蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟史及肿瘤的分期、淋巴结转移无明显相关，而与膀胱尿路上皮癌的病理分级有关。见表1。3讨论原癌基因Pokemon(又名ZBTB7A、FBI-1、OCZF、LRF)是卩0K家族的一员。其编码产物是转录抑制因子，在人类胚胎形成、细胞增殖、分化、抗凋亡中起重要作用［2］。它也是第一个被发现的ARE特异性转录抑制因子，它可通过干扰Rb基因的转录发挥致癌作用。有研究发现Pokemon主要通过ARF-Hdm2-p53-p21信号通路抑制抑癌基因的表达，也可直接抑制P53的活性，促进细胞增殖，因此认为卩oke

7、mon肿瘤发生过程中的关键始动基因［3］。2005年，Meada等［4］利用组织芯片技术在肿瘤中首次检测Pokemon的表达，发现Pokemon在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等人类常见肿瘤中存在过表达。Choi等［3］的研究发现Pokemon异常高表达见于多种实体肿瘤，鳞癌和腺癌是最常见的细胞类型。刘丽英等［5］、高志远等［6］、赵心恺等［7］的研究也得出了类似的结论。本研究使用Westernblot方法检测Pokemon在膀胱尿路上皮癌、癌旁及正常