血细胞分析仪检测原理与影响因素.ppt

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1、血细胞分析仪检测原理与影响因素前言传统的血常规分析法完全采用手工法。20世纪50年代，库尔特（W.H.Coulter）先生根据电阻抗原理，又称库尔特原理，生产出第一台血细胞计数仪，开创了血细胞分析仪的新纪元，使人工计数实现自动化。随着科学技术的发展，血细胞分析仪也日新月异，目前己普及至县或卫生院。前言美国COULTER公司的STKS、MAXM系列血细胞分析仪--电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法Bayer公司的Advia120型和新近推出的Advia2120型血细胞分析仪--激光和细胞化学法日本东亚公司的NE1500、SYSMEX公司的SE9000血细胞

2、分析仪--电阻抗和射频电导联合检测法ABBOTT公司的CD3000，CD3500血细胞分析仪--多角度激光偏振光散射检测法常用的血细胞分析仪：血细胞分析仪的主要功能血细胞计数功能测量WBC、RBC、PLT、MCV、RET等白细胞分类功能测量NE%、LYM%、MO%、EO%、BA%等血红蛋白检测功能测量HGB血细胞计数的检测原理电阻抗法流式细胞术与光散射法检测原理电阻抗法检测原理血细胞具有相对非导电的性质悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔时可引起电阻及电压的变化，出现脉冲信号脉冲的数量==细胞的数量脉冲的大小==细胞的大小该原理又称库尔特原理（Coul

3、terprinciple）测量RBC,WBC,PLT,MCV,MPV电阻抗法检测原理电阻抗法影响因素白细胞:由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病病人血中存在有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，致使白细胞计数增高。此时将稀释标本放在37度水浴10min后立即计数可消除此影响.有核红细胞出现使白细胞计数假性增高；低色素性贫血或红细胞内含大量sHb或HbCO，或某些新生儿及某些肝病病人红细胞膜脂类异常,从而产生抗溶血剂作用，红细胞溶

4、解不完全；多发性骨髓瘤的M蛋白增多时，PH低的情况下，M蛋白可与溶血剂发生反应而使结果偏高；各种病理引起的血栓前状态使血小板易于聚集，上机时影响结果电阻抗法影响因素红细胞:血小板:红细胞碎片和脂血中与血小板大小相似的乳糜微粒等作为血小板计数，导致血小板计数偏高。RBC:在某种病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又伴严重贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差。MCH:不能探测单个红细胞的结构（MCH=总HGB/RBC）MCV及MCHC:红细胞通过小孔时经受一定的形态学变化，红细胞形态与细胞质黏度有关，细胞质黏度受细胞HGB含量影响，因此HGB浓度可影响细胞

5、形态，进而影响MCV及MCHC的准确性（MCHC=HGB/HCT)流式细胞术与光散射法检测原理白细胞计数红细胞和血小板计数网织红细胞计数有核红细胞计数流式细胞术与光散射法检测原理白细胞计数利用流式细胞术,单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液通过激光照射的检测区时,使光束发生折射、衍射和散射散射光由光检测器接受后产生脉冲脉冲的大小与被照细胞的大小成正比脉冲的数量代表细胞的数量流式细胞术与光散射法检测原理红细胞和血小板计数在红细胞/血小板通道中，RBC/PLT试剂与血液混合反应，将自然状态下的红细胞/血小板变成球形并经戊二醛固定后使单个细胞逐个经过检测器低角度前向激

6、光（2°～3°）测量单个细胞体积与总数高角度激光（5°～15°）测量单个细胞的折射指数(RI)根据单个细胞体积和其相应细胞的折射指数，可将红细胞和血小板区分开来，并准确得出相应的参数。细胞的折射指数(RI):反映细胞内容物的浓度。流式细胞术与光散射法检测原理红细胞和血小板计数红细胞体积和血红蛋白浓度散射图1低角度光散射（2°-3°）2高角度光散射（5°-15°）3含有红细胞的Mie图4红细胞方法中检测的血小板流式细胞术与光散射法检测原理网织红细胞计数网织红细胞分析采用某些染料（如核酸染料Oxazine750）染色的原理，并将细胞球形化，用激光二维法对网织红细

7、胞进行分析测定。前向角光散射强度==细胞大小荧光强度==胞内RNA浓度根据荧光强度，可将网织红细胞分成低吸收荧光强度网织红细胞（LFR)、中吸收荧光强度网织红细胞(MFR)和高吸收荧光强度网织红细胞(HFR)三部分。幼稚网织红细胞显示最强的荧光流式细胞术与光散射法检测原理仪器还可提供网织红细胞成熟指数（reticulocytematureindex，RMI）。RMI=网织红细胞计数RMI增高与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效反应有关；RMI降低通常提示骨髓衰竭或无效造血。HFR+MFRLFR流式细胞术与光散射法影响因素病人样品中的有核红细胞(尤其是新生儿样

8、品)能够使白细胞计数假性升高。样品的冷凝集现象可能引