微柱凝胶检测卡培训.ppt

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1、微柱凝胶免疫检测技术操作及结果判定（一）准备工作一、标本采集：用抗凝管采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞悬液标本和血浆标本。二、血浆标本德制备：将抗凝血2000~3000rpm离心1—2min，取上清。该上清不得有絮状物或颗粒。三、红细胞标本的制备：用1000ul生理盐水和离心后10ul的红细胞配制成0.8%红细胞悬液。四、微柱凝胶试剂卡的准备：首先观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，然后将卡平衡至室温（18-25ºC），平衡后用专用离心机离心2-3min。（一）准备工作五、配套试剂准备：如反定型细胞、筛检细胞等按要求配制成所需浓度，并放置一段时间至室温（二）结果判定（二

2、）结果判定一、阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝结中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。二、阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。三、反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。（三）注意事项1.严禁使用非抗凝血标本配制的红细胞悬液，以避免出现假阳性结果。2.被测定的血清中，蛋白含量异常时会出现假阳性结果，细胞凝集团会被误认为是阳性凝集。3.实验温度过低时，因凝胶颗粒活动性减少，单个红细胞穿过时困难，易出现假阳性结果。（三）注意事项4

3、.禁止严重溶血的标本，它会对结果的判读产生强烈的干扰。5.多种药物（包括大剂量的抗菌素）的使用或在某种疾病的状态下，与直抗试验的阳性结果有关。6.血清或血浆标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉降，呈假阳性反应。（三）注意事项7.加样器具禁止接触微柱腔内壁。8.血浆或血清中含有颗粒状的物质可能会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，应对这样的标本进行离心处理。9.如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。（三）注意事项10.若结果为±或1+需进一步分析，可能为亚

4、型或弱化抗原。11.加样红细胞亦不应含有颗粒状物质，此种物质同样会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，建议使用红细胞稀释液。（四）ABO、RhD血型定型试剂卡（单克隆抗体）操作程序操作步骤：1、将准备好的试剂卡做好标记；2、将待检者0.8%红细胞悬液分别加入1-4管中，50ul；3、将待检者血清分别加入5-6管中，各50ul；4、将0.8%ABO血型反定型红细胞试剂，分别加入5-6管中，各50ul；5、离心5min(900rpm2min,1500rpm3min);6、肉眼观察结果。（五）血型判定血型抗A抗B抗D阴性对照A细胞B细胞D阳性A+–+––+B–++–+–O––+–++AB+++–––D阳性

5、A+––––+B–+––+–O––––++AB++––––（六）血型不完全抗体检测卡操作程序———不规则抗体筛检和鉴定试验操作步骤:1、将准备好的检测卡做好标记；2、分离被检者血清；3、将0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞各50ul分别加入对应的微管中；4、将待检者血清分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中，各50ul；5、37ºC孵育15min；6、离心5min(900rpm2min,1500rpm3min);7、肉眼观察结果。结果判定（以Rh血型系统为例）编号Rh-hrKiddMNSDuffyDiegoKellLewisDCEceJkbJkbMNSsFyaFybDiaKkLeaLebⅠ++––+++++–+

6、+–––+++Ⅱ+–++–++–+–++–––+–+Ⅲ++–++++++–+++––+–+（七）血型不完全抗体检测卡操作程序——交叉配血试验操作步骤：1、将准备好的检测卡做好标记；2、将受血者与献血者的红细胞和血清分离，分别将受血者与献血者红细胞配成0.8%悬液；3、将献血者红细胞悬液50ul与受血者血清50ul先后加入主侧管中；4、将受血者红细胞悬液50ul与献血者血清50ul先后加入次侧管中；5、37ºC孵育15min；6、离心5min(900rpm2min,1500rpm3min);7、肉眼观察结果。结果判定阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管尖底部，表明受血者与献血者血型相合。阳性结果：

7、红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，表明受血者与献血者血型不相合。谢谢！