实验四蛋白质的性质实验.ppt

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1、实验四蛋白质的性质实验二——等电点测定和沉淀反应一实验目的1、了解蛋白质的两性解离性质。2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。5、了解变性与沉淀的关系。二实验原理---等电点测定蛋白质是两性电解质，即其分子中含有的自由氨基和羧基均可解离，解离示意式如下：二实验原理---等电点测定蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的---等电点。二实验原理---等电点测定各种

2、蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏碱性，如组蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏酸性，人体体液中许多蛋白质的等电点在pH5.0左右，所以在体液中以负离子形式存在。所带电荷影响因素内因：酸性、碱性氨基酸含量外因：所在溶液环境的PH值二实验原理---等电点测定不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。配制各种不同pH值的

3、醋酸溶液，向各个溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。二实验原理---沉淀反应蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体溶液，保持稳定的因素有两点：①蛋白质颗粒含有很多极性基团，氨基，羧基，巯基等，亲水后形成水化层，使蛋白颗粒互相隔开，不容易聚集；②非等电点状态时，蛋白颗粒带有相同电荷，互相排斥。因此，蛋白质在水溶液中，虽分子量很大，但仍能维持稳定的溶解状态。在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因脱水和失去电荷而沉淀。二实验原理---沉淀反应蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未

4、必都已变性。所以，蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系。三实验操作---等电点测定（一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。三实验操作---等电点测定（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，摇匀。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。静置10分钟后，观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。三实验操作---沉淀反应（二）蛋白质的沉淀及变性二实验原理---沉淀反应【各种沉淀法的比较表】