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《小鼠抑胃肽elisa试剂盒实验操作说明书(科润达独家翻译)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、小鼠抑胃肽(活性型)ELISA检测试剂盒实验操作说明书（翻译）日本IBL前言简介肠降血糖素是一类胃肠激素,当人体进食后,能诱导其体内胰岛β细胞释放胰岛素同时抑制胰高血糖素的释放.GIP是1970年从肠粘膜分离出来的一种典型的的类GLP-1肠降血糖素,称为抑胃肽,后又更名为葡萄糖依赖性促胰岛素肽.它是由43个氨基酸组成的直链肽，属于胰泌素和胰高血糖素族，分子量为5100，由小肠粘膜的K细胞所产生。据报道,GIP受体在很多种细胞内(如胰腺β细胞,脂肪细胞,人成骨细胞)都会表达,对机体细胞内营养物质的储存起着至关重要的
2、作用,同时可通过调节GIP信号改善胰岛素抵抗综合症.血液中的活性型GIP(1-42)能通过二肽基肽酶IV(DPP-IV)作用迅速地失活为GIP(3-42)此ELISA检测试剂盒仅用于活性型小鼠抑胃肽(1-42)的检测原理此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色剂,显色的强度与样品中小鼠活性型抑胃肽的量成正比.检测范围7.8-500pg/mL(1.6-100pmol/L)预期用途仅供科研用，不能用于诊断用此IBL试剂盒能用于EDTA-血浆中小鼠活性型抑胃肽(GIP)的定量检测样品收集后需加入二肽基肽
3、酶IV(DPP-IV)抑制剂,或用特定的方法,确保抑胃肽的完整性.试剂盒成分1预包被板:抗GIP(C)兔子IgG,亲合纯化96Tx12酶标记抗体:(30倍浓缩)HRP标记抗GIP(N)(6A1A)小鼠IgG,亲合纯化0.4mLx13标准品:小鼠GIP(1-42)0.5mLx24EIA缓冲液:含1%BSA,0.05%吐温20PBS30mLx15标记抗体稀释液:含1%BSA,0.05%吐温20PBS12mLx16显色剂:TMB底物液15mLx17终止液:1N硫酸12mLx18浓缩洗涤液:(40倍浓缩)含1%BSA,0
4、.05%吐温20PBS50mLx1操作指南1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm)微移液管及其吸嘴量筒及烧杯去离子水冰箱(4°C)坐标纸(log/log)吸水纸试管(用于标准品稀释)温育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)2准备1)洗涤液的准备试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950mL稀释50mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液.置于冰箱内可保存2周.2)酶标记抗体的准备试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量用标记抗体稀释液稀释
5、.示例:如果你用一条板(8孔),就需800μL.的标记抗体.就用870μL的标记抗体稀释液稀释30μL浓缩液,充分混匀.并每孔各加100μL浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C3)标准品的准备加0.5mL的去离子水到瓶装标准品,制成1,000pg/mL的小鼠GIP标准品液4)标准品的稀释准备8支试管,并每支各加230μLEIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:试管1500pg/mL试管2250pg/mL试管3125pg/mL试管462.5pg/mL试管531.3pg/
6、mL试管615.6pg/mL试管77.8pg/mL试管80pg/mL(样品空白对照)吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律进行2倍比稀释，7支管的浓度范围为7.8pg/mL－500pg/mL，第8号管为0pg/mL作为样品空白对照1)样品稀释样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释如果样品中小鼠GIP的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定最佳的检测浓度.3实验步骤使用前，将所有试剂应平衡至室温，大约30min，充分混匀，确保试
7、剂质量无改变，标准曲线和样品检测必须同时进行.试剂待检测样品标准品样品空白试剂空白检测样品100ul稀释标准品（1-7管）100ulEIA缓冲液（第8管）100ulEIA缓冲液100ul盖板，于37°C下温育60min洗板4次酶标抗体100ul100ul100ul-盖板，于4°C下温育60min洗板5次显色剂100ul100ul100ul100ul室温避光温育30min终止液100ul100ul100ul100ul加终止液后,30min内于450nm处读取OD值1）设试剂空白对照，并于相应的微孔中加入100ulE
8、IA缓冲液2）确定好样品空白对照孔，检测样品孔和标准品孔，分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。3）盖板，37°C下温育60min4）用洗涤瓶或自动洗板机按以下说明洗板4次倒去孔内反应液,每孔加满稀释洗涤液洗板,再弃去废液.重复洗板4次.在吸水纸上拍干,去除残留液滴.5）除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶
