生物：121《动物细胞培养》教案（1）（中图版选修3）.doc

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1、动物细胞培养【教学目标】1.能够简述动物细胞培养的过稈、条件及应用。2.运用材料，使学生讲一步了解动物细胞培养中的研究热点、发展趋势和应用前景,以开拓视野，增强科技意识。【教学方法】运用讲授、自学以及讨论相结合的方法【教学重点】细胞培养的过程、条件及应用【教学难点】细胞培养屮的相关名词、动物细胞培养的应用前景【教学过程】1•创设情景，导入新课应用目前人类面临的一些困惑或难题，如皮肤烧伤的植皮等问题，引出进行动物细胞培养的目的，解决两个问题：（1）为什么要进行动物细胞培养？（2）什么是动物细胞培养？2.利用材料，引导白学与讨论（1）运

2、用录像资料，引导学生白学动物细胞培养的过程，并通过相互讨论，尝试解决动物细胞屮的有关名词，如接触抑制、贴壁生长、原代培养、传代培养等；（2）联系已有的知识，引导学生尝试解决第三个问题：如何进行动物细胞培养？包括动物细胞培养的过程、条件等。3.归纳总结，联系实际，联系实际，拓展延伸通过对上述三个问题的解决，学生初步了解动物细胞培养技术，在此基础上，以实例为抓手，联系实际，进一步了解动物细胞培养屮的研究热点、发展趋势和应用前呆，以开拓视野，增强科技意识。实验一动物细胞培养纽【胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动

3、物体内的生理条件，在体外进行培养.使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的％命现象。细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的煤响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构（如细胞骨架等）、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的一种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的一些变化。细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分了生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必

4、要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基木操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基木概念。木实验分两次进行.即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。I清洗与灭菌一、实验bl的能独立地进行用于细胞培养的各种器血的清洗与消毒，掌握干热火菌法、湿热火菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中T作量最大，也是最基木的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或槊料器血对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的

5、玻璃器血，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0.1个，也可能影响细胞生长。火菌手段的选择I•分重要，对不同的物品需采用不同的火菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被火菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种火菌步骤屮都介绍其使用范围。二、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯,微孔滤膜(直径25)：孔径为0・22urn,微孔滤膜(直径90)：孔径为0.22um,过滤器(肓径25)。药品：70%或75%酒精，0.1%新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0.5%过氧乙酸

6、，乳酸,37%甲醛,高镭酸钾,NaOH,盐酸,重倂酸钾，浓硫酸(工业),DEPC水［体积分数0.1%的焦洪酸二乙酯(diethylpyroearbonate)］。仪器：超净台，干燥箱，高压锅，过滤器，过滤泵。四、实验步骤(一)清洗1.新玻璃器1UL的清洗先用自来水刷洗，再浸泡5%稀盐酸以屮和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。2・使用过的玻璃器肌的清洗⑴使用过的培养用品应立即浸入清水，避免干涸难洗。(2)用洗涤剂清洗玻璃器川I,臼来水清洗数遍，倒置H然干燥。(3)浸酸性洗液过夜。(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10・15次去除残余酸液

7、，蒸僧水涮洗3次，倒置烘干。(5)包装(牛皮纸或一般纸)。(6)高压(15磅20min)或干热(170C2h)灭菌。(7)贮存备用。1.胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0.2%NaOH煮沸10-20min。⑵自来水清洗10次。(3)再用1%稀盐酸浸泡30min0（4）自来水清洗10次，蒸馆水涮洗3次。晾干，高压灭菌（见（二）消毒与灭菌）。I口胶塞不必丿IJ酸碱处理可肓接川洗涤剂煮沸和清洗数次，过蒸憎水，晾干，包装并高压灭菌示，便可使用。（二）消毒1•物理消毒法（1）紫外线消毒用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭

8、菌的培养器肌，如测料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法乙一。（2）干热灭菌主要用于玻璃器肌的灭菌。将用于细胞培养的器肌放人干燥箱内，加热至160°C,保温90-120mine用于RNA提取实验的用品则需180°C,保温5-8h。（