2013届高考生物第1轮总复习 第2讲微生物的培养与应用课件 新人教版选修1（广东专版）.ppt

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1、第2讲微生物的培养与应用一、微生物的培养与应用1.微生物的实验室培养(1)培养基①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。②分类a．按培养基的物质性质可以分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。b．按培养基的化学成分可以分为天然培养基和合成培养基。c．按培养基的用途可以分为选择培养基和鉴别培养基。③培养基配方及营养要素基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。【友情提醒】①微生物最常用的碳源是

2、糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。②对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。③有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。④制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。无菌技术主要操作要求a．实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。b．实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。(2)无菌技术2．纯化大肠杆菌以及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称

3、量、溶化、灭菌、倒平板。(2)纯化大肠杆菌①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。②方法：平板划线法、稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(3)菌种的保藏①短期保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。②长期保存：－20℃甘油管在冷冻箱中保藏。【友

4、情提醒】平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_____________________________

5、_______________。(3)培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌及消毒方法依次是()①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤【解析】碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。培养基用高压蒸汽

6、灭菌；培养皿能耐高温，可用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。【答案】(1)葡萄糖　尿素(2)有选择作用。因为此配方中尿素是惟一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长(3)A二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．分离的原理土壤中的细菌能合成脲酶，能把尿素分解成无机物。2．分离分解尿素的细菌所使用的特定培养基分离分解尿素的细菌的培养基应为选择培养基，培养基中的氮源只

7、有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。其配方如下：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素(惟一氮源)1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。3．统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于

8、样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数＝×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。4．细菌分离与计数的实验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。【例2】