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1、实验一、血红蛋白吸收光谱的测定一、溶血液的制备擒拿固定小白鼠，用手术银摘除其一只眼球，取眼底血2滴于10ml蒸憎水（D.W）屮,混匀。二、吸光度测定与A-Xlllj线的绘制取两只比色皿，分别装入蒸馆水、溶血液，在波长（入）520nm-600nm的范围内，每次均以D.W调零，用分光光度计测溶血液吸光度A值，再在坐标纸上绘制A-Xlllj线，并找出入抄值。XA520525530535537539541543X545550555560565568570572AX574576578580585590595600A▲注意事项：1•入的选择原则:远离吸收
2、峰时,间隔5nm；靠近吸收峰时，间隔2nm。2.溶血液的A值在0.2〜0.8Z间与溶血液的浓度线性较好。3.氧合血红蛋白在波长为541nm、577nm、404nm^280nmHe210nm处有峰值；还原血红蛋白在波长555nm处有峰值。本次实验对象为氧合血红蛋白。4.在A-入曲线屮描出入祸、入辭，并写岀具体波长值。三、结果及结果分析实验二、蛋白质性质实验一、等电点（pl）测定1、操作及结果1号管(pH=5.9)2号管(pH=5.3)3号管(pH=4.7)4号管（pH=4」）5号管(pH=3.5)0.01mol/L醋酸0.3————0」mol/
3、L醋酸—0.150.52.0—lmol/L醋酸————0.8D.W(ml)4.24.354.02.53.7混匀，各加入0.5ml酪蛋白液，混匀，静置，观察浑浊度。lOmin后的浑浊度30min后的浑浊度2、注意事项:（1）观察颜色、浊度采用白色背景。（2）pH〜pI时，试管屮底部沉淀最多，上端较清亮。3、结论二、却三酮反应1、操作及结果1号管2号管5%鸡蛋口溶液（滴）5—D.W（滴）—50.1%苗三酮（滴）22摇匀，微火加热煮沸1~2分钟,冷却后,观察结果。结果2、注意事项:加热用外焰；防局部高温；防爆沸。3、结论实验三、血清总蛋白测定1.原
4、理：双缩腺反应2.操作：用对比法测定。空H管（B）标准管（S）测定管（T）D.W50n1——TP标准液（43.8g/L）—50u1—血清——50u1双缩腺试剂2.5ml2.5ml2.5ml混匀，室温30minJTJ,540mn以空白管调零，测定标准管、测定管吸光度As、AT3.计算：血清TP含量（g/L）=（At/As）xCs,-K屮Cs=70g/L4.成人血清参考范
5、韦I：60-80g/L实验四、血清白蛋白测定1.原理：澳甲酚绿法（BCG法）pH4.2BCG+Alb草绿色复合物黄色pl=4.7Xn„-630nm2.操作：用对比法测定。设置试
6、剂空白、标准对照（Cs=43.8g/L）,按样品与试剂比=10u1:2ml加样，室温lOmin,630nm测As、A.再计算血清Alb的含量。3.计算：血清Alb含量（g/L）=（At/As）xCs，其中Cs=40g/L4.成人血清Alb参考范围：35〜55g/L实验五、ATP纸电泳一、操作1、点样：取15cm滤纸一条，距一端约6.0cm处用铅笔划一基线，用点样管吸取样液10P1,分三次将样液轻轻点在滤纸基线上，边点样边用电吹风冷风吹干。2、电泳：将点样滤纸平铺在电泳支架上，点样端靠近负极（因为ATP的pIV缓冲液pH）,滤纸完全被缓冲液浸湿
7、示，调电压至200V,电泳30min,关电源，吹T。3、荧光观察：将吹干的滤纸在紫外灯253.7nm下观察，用铅笔划出荧光斑块，贴在实验报告上。（激发波长为253.7nm。该仪器操作时与“点样”、“365A”按钮无关）二、结果及结果分析实验六、酶的竞争性抑制操作及结果（体积：滴）1号管2号管3号管肌肉靡1010—D.W10—205%丙二酸—10—3%琥珀酸1010100.02%甲烯蓝222处理各管摇匀石蜡油（加后不再摇）888观察结果处理37°C水浴15分钟结果二、结论实验七、血清蛋白质醋纤膜电泳一、操作1、醋纤膜（醋酸纤维素薄膜）预处理在醋
8、纤膜毛面距一端1.5cm处用铅笔划线，以备点样。将醋纤膜充分浸湿于巴比妥缓冲液屮。取出，用滤纸吸干。2、点样将醋纤膜垫好后，用盖玻片醮上血清，均匀点样于毛面。3、电泳将醋纤膜毛面向下，悬空平铺于电泳槽的纱布上，点样端靠近负极。平衡5min后，按10V/cm长（醋纤膜长度）调好电压后，电泳50min,关掉电源。4、染色：取出膜，置于氨基黑10B的染色液屮，染色5min,用银了取出后依次反复漂洗3次，宜至背景较淡为止，再用滤纸吸干，贴在实验报告上。二、结果及结果分析实验八、pH、温度等对酶活性的影响一、操作及结果1稀唾液的制备试验者用洁净水漱口肩
9、，做咀嚼动作，将产生的睡液置于干净的烧杯屮，用适量D.W稀释后即得。2、反应及结果（体积：滴）pH5.0管pH6.8管pHS.O管相应pH的磷酸缓冲液101010O
