常用荧光探针小结.ppt

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1、常用荧光探针小结一、异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate,FITC）FITC有两种异构体，性质稳定，低温下干燥保存，其性状多年不变，室温下也能保存两年以上。异构体I、II均能与蛋白质良好结合，但异构体I的荧光效率更高，与蛋白质的结合也更稳定。FITC的最大吸收光谱为490----495纳米，最大发射光谱为520-530nm，呈明亮的黄绿色荧光。FITC含有异硫氰基，在碱性条件下能与IgG的自由氨基（主要是赖氨酸的-氨基）形成荧光抗体结合物。1Exitationλmax:495nm;

2、Emissionλmax:519nm;SolventpH:8.0023Immunocytochemistry/Immunofluorescence-alphaTubulinantibody[DM1A](FITC)(ab64503)ICC/IFimageofab64503stainedhumanHeLacells.Thecellsweremethanolfixed(10min),permabilisedin0.1%PBS-Tween(20min)andincubatedwiththeantibody(ab64503

3、,1µg/ml,FITCconjugated(green))for1hatroomtemperature.1%BSA/10%normalgoatserum/0.3Mglycinewasusedtoblocknon-specificprotein-proteininteractions.AlexaFluor®594WGAwasusedtolabelplasmamembranes(red).DAPIwasusedtostainthecellnuclei(blue).4二、荧光素酯Carboxyfluoresceind

4、iacetatesuccinimidylester(CFDA-SE)isacellpermeabledyegenerallyusedinanimalcellproliferationresearch.CFDA-SEenterscellsbydiffusionandiscleavedbyintracellularesteraseenzymestoformanamine-reactiveproduct,CFSE.Thisproductproducesadetectablefluorescenceandcovalent

5、lybindstointracellularlysineresiduesandotheraminesources.酯酶5视频：TheUseofCarboxyfluoresceinDiacetateSuccinimidylEster(CFSE)toMonitorLymphocyteProliferation6四甲基异硫氰酸罗达明，它是一种紫红色粉末，较稳定。其最大吸收光谱为550nm，最大发射光谱620nm，呈橙红色荧光，与FITC的黄绿色荧光对比清晰，与蛋白质结合方式同TITC。它可用于双标记示踪研究。三、异硫氰

6、酸罗丹明（TMRITC）7Detectionofα-tubulininA549cellsdemonstratesuseofrhodamine-labeledsecondaryantibody.Cellswereprobedwithamouseanti-α-tubulinprimaryantibody(0.4µg/mL)andRhodamine-goatanti-mousesecondaryantibody(2µg/mL).NucleiwerelabeledwithHoechstDye.Imageswereacqu

7、iredbyfluorescencemicroscopy.A.Fluorescenceimageshowsadelicatenetworkofα-tubulin(pseudo-coloredgreen)locatedexclusivelyinthecytoplasm.B.NuclearcounterstainwithHoechstDye(pseudo-coloredblue)C.Mergedimage.8AC41323-0010RB200，也称丽丝胺罗丹明B无定形褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，

8、可长期保存，最大吸收光谱为570nm，呈明亮的橙色荧光，因与FITC的黄绿色有明显区别，故被广泛用于对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色。标记方法方法：取1gRB200及五氯化磷（PCL5）2g放乳钵中研磨5min（在毒气操作橱中），加10ml无水丙酮，放置5min，随时搅拌，过滤，用所得溶液进行结合。将每亳升血清用1ml生理盐水及1ml碳酸盐缓冲液（0.5mo