基于CdSe-CdTe量子点能量转移荧光猝灭法测定前列腺抗原.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第2期2012年2月ChineseJournalofAnal5ticalChemistry224～229基于CdSe—CdTe量子点能量转移荧光猝灭法测定前列腺抗原陶慧林黎舒怀李建平(桂林理工大学化学与生物lT程学院，桂林541004)摘要研究了CdSe-CdTe量子点间发生的荧光共振能量转移，并用于荧光猝灭法测定超痕量前列腺抗原(PSA)。在pH8．0的TrisHC1缓冲溶液中，CdSe-CdTe间发生有效能量转移，使CdTe荧光大大增强。PSA抗原与CdTe标记的PSA抗体发生特异

2、性反应，使能量转移体系的CdTe上的荧光强度降低，即发生猝灭。建立了CdSeCdTe能量转移荧光猝灭法测定PSA抗原的方法。在优化的实验条件下，PSA抗原的线性范围为0．28～10g，L，相关系数r一0．9992，检出限达1．5×10gg／L(n一11)。关键词量子点；共振能量转移；荧光猝灭法；前列腺抗原；CdSe；CdTe引言荧光共振能量转移[1(Fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)是指在两个不同的荧光基团中，若一个荧光基团(供体Donor)的发射光谱与另一个基团(受体Acceptor)

3、的吸收光谱有一定的重叠，两个荧光基团问的距离合适时(一般小于10nm)，即可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象。量子点(Quantumdots，QDs)是直径约为2～20am，能够接受激发光产生荧光的半导体纳米颗粒。传统的FRET研究主要集中于有机荧光分子类，作为一种新型FRET试剂，QDs具有许多有机荧光分子不具备的优点，如有可调谐的激发波，抗漂白性，同时连接多个染料分子、狭窄的激发波长和远离激发峰激发等优良的光学性质。因此，QDs可以成为比有机荧光分子更好的FRET的供体或受体]。近年来，QDs作为供体的FRET已被广泛报道【3

4、~9]。研究表明，量子点也可以作为FRET受体叫”，为同时使用不同量子点作为FRET供体和受体，建立新型的FRET提供了理论依据。目前，这方面的研究尚处于起始阶段，相关报道较少[12,13]。荧光能量转移体系发光强度大，灵敏度高，方法简单。本研究将CdSe-CdTe能量转移体系应用于PSA测定。详细研究了其能量转移规律，计算了荧光共振能量转移相关参数，建立了CdSe—CdTe能量转移荧光猝灭法测定超痕量PSA抗原的灵敏方法。2实验部分2．1仪器与试剂RF一5301PC荧光光度计(日本岛津公司)；TL卜1901双光束紫外可见分光光度计(

5、北京普析通用仪器有限公司)；FA1004型电子分析天平(上海市天平仪器厂)；pHS一3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)。人前列腺游离PSA抗原，鼠抗人前列腺PSA单克隆抗体(桂林英美特生物技术有限公司)；CdC1：、巯基乙酸、碲粉、NaBH、卜乙基一3(二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)，N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)、NaOH等试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。2．2实验方法2．2．1水溶性量子点的合成(1)CdSe水溶性量子点的制备参考文献[141并做适当修改，在三口烧瓶中加入3mL蒸馏水，通氮气2～3rain除氧。然后分别加入

6、0．04gSe粉，O．12gNaBH，停止通氮，塞住瓶口，置于冰浴中反应2h，得到无色的澄清溶液NaHSe。在氮气保护下，在100mL0．0025mol／LCdC1溶液中加入0．1mL巯基乙酸，调节pH≈9，继续通氮除氧30rain，并在搅拌下迅速加入3mL201卜O825收稿；201卜O9_29接受本文系国家自然科学基金(No．21165007)资助项目E-mail：likianping@263．net第2期陶慧林等：基于CdSe-CdTe量子点能量转移荧光猝灭法测定前列腺抗原225NaHSe溶液，继续于90℃下加热搅拌回流2．5h

7、，即得CdSe水溶性量子点。(2)CdTe水溶性量子点的制备参考文献[15]并做适当的修改，称取0．048gTe粉和0．12gKBH于三El烧瓶中，混匀，加入2mL水，在65℃水浴和磁力搅拌下反应20min，直至黑色Te粉完全消失，得到紫色透明的0．2mol／LKHTe溶液，备用。在氮气的保护下，在200mLo．0025mol／LCdC1水溶液中，加入0．1mL巯基乙酸，调节pH≈10，在强磁力搅拌下，继续通氮气除氧30min，迅速加入2mLKHTe溶液，继续于95℃下加入搅拌回流2h，即获得颜色透明的CdTe水溶性量子点。2．2．2

8、PSA抗体的标记参照文献[16]，取上述制备的CdTe溶液20mL于锥形瓶中，加人0．0005gEDC，0．0006gNHS，200gLPSA抗体，置于30℃摇床中避光振荡1．5h，即得到标记了PSA抗体的CdTe水溶性