植化实验经验.doc

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1、植化实验经验步骤：1.  原始资料收集与整理：（1）原始资料力求真实、详尽。利用手工检索（中国药学文摘、中文科技资料目录中草药及主要大型文献）和网检（维普、同方）结合，对研究内容及其相关内容（如同属植物）进行检索，重点为网检；追踪检索用手检。（2）整理消化原始资料。对原始资料，可分为品种资源、化学成分、药理药效、临床研究等方面进行认真整理。熟悉前人的工作及其思路。2.  实验方案设计：从自身研究实际出发，参考前人的经验，制定实验方案，并根据实验进程中的实际情况作不断地调整和改进。3.  提取分离：推荐四步分离法。第一步：粗分段。利

2、用流动相不同和混合物的极性不同，将其分成10～15段。（1）  样品与上柱硅胶的用量：1:10～1:20。（2）  溶剂的选择主要以TLC指导。选择展开时斑点不重叠、不拖尾的展开剂为流动相。（3）  推荐用香草醛或茴香醛作为显色剂。（4）  开始时溶剂的梯度应尽量细些。如A:B（100、98:2、96:4、94:6、92:8、90:10、85:15、80:20、70:30……），一般冲2个柱体积。（5）  流份的合并。合并时可粗些。第二步：粗分。（1）  样品与上柱硅胶的用量：1:80～1:100。（2）  洗脱：TLC指导，Rf

3、值0.2～0.3，溶剂系统尽量不与粗分段相同。（3）  梯度：可粗些，3～4个梯度即可。先上TLC摸索的溶剂系统，前面的成分冲下来后，后面的梯度可大些。（不追求完美，只求效率）（4）  合并：选择主斑点合并。第三步：细分。指只含有2～3个斑点。（1）  常用材料：ToyopearlHW-40、SephadexLH-20、silicagel（200～300目）（2）  样品与上柱硅胶的用量：1:100～1:200。（3）  溶剂：主要选择分离度好的系统（4）  梯度：换梯度应具体分析，根据流份决定可多冲几倍柱体积。（5）  合并：尽

4、量不要引入杂质。第四步：纯化。方法主要有：ToyopearlHW-40、SephadexLH-20、silicagel（TLC用，注意：硅胶吸附引起损失大，凝胶相对吸附较小）、结晶法（量大时用）、制备HPLC法。推荐多用凝胶柱。