单宁酸对布氏田鼠代谢的影响.pdf

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1、YangZhouUniversityM．S．MasterDissertationEffectsoftanninacidonthemetabolismofBrandt’Svoles(Lasiopodomysbrandtii)Candidate：LiuQianAdvisor：Prof．ShengmeiA．P．ManhongYeMajor：BiochemistryandMolecularBiologyCollegeofBioscience&Biotechnology,YangzhouUniversityMay，2014到值；望r主酸盘查医幽鼠岱塑的髭堕I单宁酸对布氏田鼠代谢的影响研究生：

2、刘倩导师：杨生妹教授叶满红副教授中文摘要动植物问的协同进化一直是生物学的研究热点，植食性动物取食植物，植物产生大量的次生化合物抵御植食性动物的取食，而动物又会通过不同的机制分解利用次生化合物。布氏田鼠是生长在内蒙古草原的小型植食性哺乳动物，它们所喜食的植物含有较高水平的次生化合物。本论文将通过给布氏田鼠长期(37天)饲喂含有单宁酸的食物，(一)观察其唾液蛋白电泳条带、测定唾液和粪便各种氨基酸含量；(二)测定肝脏各种抗氧化相关酶酶活力及酶含量；(三)克隆布氏田鼠胆固醇合成关键酶3一羟．3．甲戊二酸单酰CoA还原酶(嬲CR)全长基因、实时荧光PCR法测定其mRNA表达及Westernb

3、lot法测定其酶蛋白含量；(四)扩增布氏田鼠转铁蛋白(聊cDNA片段。测定其mRNA表达及酶蛋白含量，以研究植物次生化合物对布氏田鼠代谢的影响及布氏田鼠对次生化合物的适应对策，为草原动植物间的协同进化提供理论依据。研究结果如下：1)长期摄入单宁酸后，布氏田鼠唾液蛋白中出现新的条带，唾液和粪便中其他氨基酸含量没有变化，但脯氨酸和组氨酸含量明显增加。说明单宁酸会使布氏田鼠产生富含脯氨酸和组氨酸的唾液蛋白来结合食物中的单宁酸。2)摄入单宁酸后，布氏田鼠肝脏过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)：谷胱甘肽还原酶(GR)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等酶活力均显著增加。Western

4、blot表明GPx的蛋白含量显著增加。3)将简并引物扩增的布氏田鼠HMGCR序列与5'RACE得到的序列及经过3’RACE得到的片段进行拼接，获得布氏田鼠HMGCR全长2633bp的序列，其编码876个氨基酸残基，该氨基酸序列与同属仓鼠科的中国仓鼠和金黄地鼠的HMGCR序列的相似性最高，达到95％。饲喂单宁酸使布氏田鼠HMGCRmRNA表达降低，HMGCR含量也明显降低。4)PCR扩增布氏田鼠形产生427bp的特异性产物，翻译141个氨基酸残基，该肽段序列也是与中国仓鼠的转铁蛋白序列相似度最高，达86％。单宁酸使该蛋白的转录和翻译均增加。11扬州太堂亟±堂僮j金塞以上结果表明，长期

5、摄入单宁酸影响布氏田鼠肝脏代谢相关酶和蛋白质的表达，通过降低HMGCR的转录和翻译，降低胆固醇及其它甾类物质的合成。但布氏田鼠会分泌富含脯氨酸及组氨酸的唾液蛋白结合食物中的单宁酸，以减少单宁酸对其消化酶等功能蛋白的结合，减轻单宁酸对布氏田鼠吸收食物中营养物质的影响；布氏田鼠也通过增加各类抗氧化酶的活性和数量，增加其抗氧化功能；并通过增加Tff的转录和翻译，增加机体对铁的吸收，保证铁结合蛋白或酶的正常功能。因此，布氏田鼠可以通过不同机制减少单宁酸对它的不利影响。关键词：布氏田鼠；次生代谢物；单宁酸；HMGCR；try,基因表达Effectsoftanninacidonthemetab

6、olismofBrandt’Svoles(Lasiopodomysbrandtii)M．S．Candidate：QianLiuAdvisor：Prof．ShengmeiYangA．PManhongYeAbstractTheeo-evolutionbetweenherbivorousanimalsandplantsisoneofthemainpointsofbiologicalresearch．HerbivorousAnimalsneedtofeedonplantsfortheirsurvival．Buttheplantsproduceavarietyofplantssecondme

7、tabolites(PSMs)tohinderthefeedingofanimal．Then，theanimalschangetheirmetabolismstyletoadaptthePSMsinfood．Brandt’SvoleisoneofherbivorousmammalsinhabitinginInnerMongoliaandfeedonplantswithhi啦amountofPSMs．Theaimofthisstudywastoinvestigateth